[发明专利]E184L基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及E184L基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用。本发明首先发现了非洲猪瘟病毒E184L蛋白能够抑制poly(dA:dT)诱导的IFN‑β、NF‑κB及ISRE启动子的激活，抑制poly(dA:dT)诱导的IFN‑β及其下游因子ISG15、ISG54、IL‑6、MCP1和TNF‑α等细胞因子的产生，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂应用；其次本发明通过基因工程手段在非洲猪瘟亲本毒株ASFV CN/GS/2018中缺失E184L基因编码蛋白的免疫抑制功能，降低了亲本毒株的免疫抑制活性，获得了一株安全性高的减毒非洲猪瘟候选疫苗株；所述减毒非洲猪瘟候选疫苗株免疫猪后，降低了猪的免疫抑制活性和致病性，其免疫后能够诱导显著的中和抗体产生，可作为安全和有效的防控非洲猪瘟疫情的候选疫苗毒株，具有极大的社会价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种E184L基因缺失减毒非洲猪瘟病毒株的构建及其作为疫苗的应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus， ASFV)引起的猪的一种接触传染性、广泛出血性烈性传染病，患病猪出现体温升高、呼吸困难、黏膜广泛出血等临床症状，具有发病病程短、病死率高等特征，强毒株可导致家猪在感染后5-14天内死亡，死亡率接近100％，是危害世界养猪业健康发展最严重的传染病之一。 ASF疫情在全球呈流行扩大趋势，周边国家疫情逐年增多，存在自然疫病病源地。目前，仍然缺乏有效的疫苗和疾病控制措施，一旦发生非洲猪瘟疫情，要彻底根除，对疫区的隔离和对受感染动物进行扑杀仍然是主要应对方法。因此，研究病毒结构，免疫逃逸机制，以及免疫保护机制的阐明，进而研发出安全有效的疫苗十分重要。

ASFV属于双链DNA病毒，是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)，非洲猪瘟病毒属的唯一成员，也是唯一通过节肢动物，即软蜱传播的DNA病毒。ASFV结构复杂、是一种大型包膜病毒，平均直径约为200nm，病毒基因组庞大，为线性双链DNA，全长170～194kb，编码大约150～200种蛋白，其中许多蛋白对病毒复制非必须的，但在病毒逃逸宿主免疫防御方面有着重要作用，涉及的免疫逃逸机制复杂。

天然免疫(innate immunity)是宿主抵抗外来病原感染的必不可少的第一道防线，主要由生理屏障、化学屏障和免疫细胞、分子构成。天然免疫通过模式识别受体(PRRs)识别侵入宿主机体的病原相关分子模式(PAMPs)。DNA病毒入侵猪体内产生的病原DNA可被受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic GMP-AMP synthase，cGAS)识别并通过接头蛋白髓样细胞分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)和干扰素刺激基因(stimulator of i nterferon genes，STING)，激活转录因子干扰素调节因子3(IFNregulatory factor 3，IRF3) 和NF-κB(nuclear factorκB)，IRF3在此过程中聚合形成二聚体并和NF-κB一起转移至细胞核内诱导产生I型干扰素(type I interferon，IFN-I或IFNα/β)抵御病原入侵。