[发明专利]纳米抗体及其应用

说明书

本发明涉及生物医药领域，特别涉及针对RSV病毒F蛋白的纳米抗体、其编码序列在诊断和治疗中的应用。本发明提供的RSV纳米抗体具有独特的CDR1、2和3区序列，使所述抗体对RSV抗原具有特异的识别和结合能力。而与其他非特异性蛋白无交叉反应。通过中和活性检测，其显示了良好的中和活性，可单独或与其他药物或抗体等联合应用，用于制备RSV治疗性药物。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别涉及针对RSV病毒F蛋白的纳米抗体、其编码序列在诊断和治疗中的应用。

背景技术

呼吸道合胞病毒 (respiratory syncytial virus， RSV)是导致婴幼儿、老年人和免疫力低下的个体严重下呼吸道疾病的主要病因。 RSV 感染呼吸道黏膜上皮细胞，病毒蛋白能在胞内引起复杂的信号传导，导致各种细胞因子表达异常，这可能是导致严重下呼吸道疾病的原因。相关灭活疫苗加重疾病的重要特征是诱导相关细胞因子大量分泌，从而引起不平衡的体液免疫和细胞免疫应答。

RSV属副粘病毒科肺炎病毒属，基因组为单股负链RNA，编码11种蛋白质，其中3个为跨膜包膜糖蛋白F蛋白(fusion protein)、G蛋白(attachmentprotein)和SH蛋白(smallhydrophobic protein)，根据G蛋白抗原性的不同，将RSV分为A、B两个亚型。F蛋白通过介导RSV与宿主细胞膜融合导致RSV核糖核蛋白穿入到细胞浆。感染后，表达在细胞膜上的F蛋白可促进感染细胞与邻近细胞细胞膜融合形成合胞体。

F蛋白在RSV不同亚型间具有高度的抗原同源性，是主要的交叉保护性抗原，同时还是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的主要靶抗原，因此，F蛋白是机体免疫系统重要的靶抗原，可介导产生保护性抗体和细胞免疫反应，且能提供交叉保护作用。F是RSV最主要的表面结构蛋白之一，作为最重要的中和抗原，F蛋白具有大量的中和抗体识别表位。

单克隆抗体在一些应用方面仍存在缺陷：分子质量大(150kDa)限制其组织穿透能力；在体内能够引起免疫反应，进而中和抗体活性；半衰期较长限制其在分子成像中的应用；生产操作复杂、生产成本高。

1993 年，科学家在骆驼体内发现天然缺失轻链的重链抗体(Heavy chainantibodies，HcAbs)，其抗原结合域可变区，也被称为 VHH 或纳米抗体(nanobody，Nb)，为抗体小型化研究提供了新的发展方向。随后，软体鱼类体内也发现了骆驼体内类似的抗原受体(new antigen receptor，NAR) 。与其他小分子抗体相比，纳米抗体具有如分子质量小(12～15kDa)、亲和力高、免疫源性低、可溶性好、稳定性好、表达量高等独特的性质，使其在疾病诊断及治疗方面更具优势。因此，提供针对于RSV病毒F蛋白的纳米抗体、其编码序列在诊断和治疗中的应用具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了针对RSV病毒F蛋白的纳米抗体、其编码序列在诊断和治疗中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了抗呼吸道合包病毒（RSV）病毒F蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体包括三个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3；其中

（I）、所述纳米抗体的互补决定区CDR1具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；和/或

所述纳米抗体的互补决定区CDR2具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；和/或

所述纳米抗体的互补决定区CDR3具有如SEQ ID No.3或4所示的氨基酸序列；

或（II）、如（I）所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与（I）所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；

或（III）、与（I）或（II）所述氨基酸序列具有80%以上同一性的氨基酸序列。