[发明专利]一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法

权利要求书

1.一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、质粒的构建：将目的基因NF155和NF186分别与载体连接，获得目的质粒；

S2、将步骤S1获得的质粒转染293T细胞，获得病毒；

S3、将步骤S2获得的病毒感染293T细胞，获得转染细胞；

S4、利用转染细胞表达蛋白对血清和脑脊液中抗体进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，其特征在于，所述步骤S1具体步骤如下：1)将纯化的目的基因NF155和NF186分别与载体连接，连接产物分别命名为pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001160331.1]/EGFP以及pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001005388.3]/EGFP；2)分别取连接产物转化超级感受态细胞；3)挑取菌落接种培养，提取质粒，得到目的质粒pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001160331.1]/EGFP和pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001005388.3]/EGFP。

3.根据权利要求1所述的一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，其特征在于，所述步骤S2具体步骤如下：1)取293T细胞铺板；2)取目的质粒分别与质粒pMDLg/pRRE，PMD2.G，pRSV-Rev，按比例8：8：2：2混匀；3)将2)的混合液加入1)细胞孔板中培养；3)收集病毒上清颗粒保存。

4.根据权利要求1所述的一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，其特征在于，所述步骤S3具体步骤如下：1)取293T细胞培养；2)向细胞中加入含有病毒的培养基；3)设置不加病毒的细胞作为阴性对照，在第2天开始向培养基中加入嘌呤霉素，后续每天加大抗生素量，当对照细胞及未表过细胞全部死亡时，记录药筛浓度，保留药筛后感染细胞。

5.根据权利要求1所述的一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，其特征在于，所述步骤S4具体步骤如下：1)去转染细胞进行铺片培养、固定、封闭、通透；2)向细胞中加入待检测样本反应；3)加入Alexa Fluor 555标记的羊抗人IgG反应；4)使用荧光显微镜。