[发明专利]一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法

说明书

本发明公开了一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，包括如下步骤：S1、质粒的构建：将目的基因NF155和NF186分别与载体连接，获得目的质粒；S2、将步骤S1获得的质粒转染293T细胞，获得病毒；S3、将步骤S2获得的病毒感染293T细胞，获得转染细胞；S4、利用转染细胞表达蛋白对血清和脑脊液中抗体进行检测。本发明通过构建合适的质粒并转染到细胞中，采用特殊的培养基进行筛选，产生稳定表达效果后，再根据血清或脑脊液中相应抗体与其表达蛋白结合，从而准确的检测有无相应抗体，提升检测灵敏度及准确性。

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，具体涉及一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法。

背景技术

针对郎飞结的自身抗体可能是致慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病的重要原因，在一些自身免疫性神经系统疾病中，朗飞结区、结侧区、近结侧区的分子都有可能成为自身抗体的靶抗原。NF属于免疫球蛋白超家族，有NF155和NF186两种亚型。NF155位于郎飞结侧区胶质环中，使接触蛋白相关蛋白(Caspr)和接触蛋白(Contactin)在结侧区聚集，形成间隔样连接，促进神经细胞黏附和轴突生长。NF186位于郎飞结和轴突起始段，抑制细胞黏附和轴突增生。两者在神经发育及维持胶质细胞和轴索结构稳定的过程中均发挥重要作用。

目前NF155和NF186抗体的检测技术为ELISA酶联免疫法和细胞免疫荧光法，ELISA方法使抗原结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性及酶的活性，待测抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原起反应，该方法特异性好，但蛋白抗原提纯到最后包被处理，氨基酸结构已不具备天然的表达构象，免疫原性出现改变，这导致在反应过程中存在一定的错识抗原抗体反应，出现假阳性，同时国外进口，检测成本高。而细胞免疫荧光是目前主要的检测方式，免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗原上，与其相应的抗体结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应的过程。免疫荧光可以准确识别正确的表达位点，但同时免疫荧光法存在不同质粒载体、不同比例的质粒浓度，就有不同的转染效率，最终导致出现检出率不同的问题。

发明内容

本发明目的在于提供一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，通过构建合适的质粒并转染到细胞中，采用特殊的培养基进行筛选，产生稳定表达效果后，再根据血清或脑脊液中相应抗体与其表达蛋白结合，从而准确的检测有无相应抗体，提升检测灵敏度及准确性。

本发明通过下述技术方案实现：

一种血清及脑脊液中神经束蛋白NF155和NF186抗体的检测方法，包括如下步骤：

S1、质粒的构建：将目的基因NF155和NF186分别与载体连接，获得目的质粒；

S2、将步骤S1获得的质粒转染293T细胞，获得病毒；

S3、将步骤S2获得的病毒感染293T细胞，获得转染细胞；

S4、利用转染细胞表达蛋白对血清和脑脊液中抗体进行检测。

所述步骤S1具体步骤如下：1)将纯化的目的基因NF155和NF186分别与载体连接，连接产物分别命名为pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001160331.1]/EGFP以及pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001005388.3]/EGFP；2)分别取连接产物转化超级感受态细胞；3)挑取菌落接种培养，提取质粒，得到目的质粒pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001160331.1]/EGFP和pLV[Exp]-Puro-CMVhNFASC[NM_001005388.3]/EGFP。