[发明专利]核酸检测方法

权利要求书

1.一种核酸检测方法,其特征在于包括如下步骤：

1)合成目标核酸或从待测生物样本中获取含目标核酸的待测物

从GenBank检索到目标核酸，从中选出特异性核苷酸序列，并将一部分序列作为捕获功能引物区(5)，另一部分序列作为标记功能引物区(6)；

根据所述捕获功能引物区(5)的序列，设计合成捕获功能区引物(1)，捕获功能区引物(1)包括A段和B段，所述A段的序列与捕获功能引物区(5)的序列互补；

根据所述标记功能引物区(6)的序列，设计合成标记功能区引物(2)，标记功能区引物包括C段和D段，所述C段的序列与标记功能引物区(6)的序列互补；

将氨基修饰的通用引物(4)通过交联吸附法与固相支持物(3)结合，形成包被有通用引物的固相支持物；所述通用引物的序列与所述捕获功能区引物(1)的B段的序列互补；

2)将所述待测物或目标核酸与所述捕获功能区引物(1)和标记功能区引物(2)一起放入杂交缓冲液中，混合均匀，滴加到所述包被有通用引物的固相支持物上，孵育，弃去液体，用杂交洗液洗涤，弃去液体，获得捕获有目标核酸的固相支持物(14)；

3)采用下述两种方式之一种进行：

方式一：

将带有酶(8)标记的特异性抗体(7)加入到抗体稀释液中，混合均匀，滴加到步骤2)获得的捕获有目标核酸的固相支持物(14)上，孵育，弃去液体，用抗体洗液洗涤，弃去液体，得到第一种固相支持物(15)；

将含有酶的底物(10)的检测液滴加到的第一种固相支持物(15)上，所述酶的底物与酶进行化学发光反应或进行显色反应,得到第一产物(17)，用酶标仪检测第一产物信号，根据信号强弱判断待检测核酸的含量。

方式二：

a将特异性抗体(7)加入到抗体稀释液，混合均匀，滴加到步骤2)获得的捕获有目标核酸的固相支持物(14)，孵育，弃去液体，用抗体洗液洗涤，弃去液体；

b将带有酶(8)标记的二抗(9)加入到抗体稀释液中，混合均匀，滴加到步骤a获得的固相支持物上，孵育，弃去液体，用抗体洗液洗涤，弃去液体，得到第二种固相支持物(16)；

将含有酶的底物(10)的检测液滴加到第二种固相支持物(16)上，所述酶的底物与酶进行化学发光反应或进行显色反应，得到第二产物(18)，用酶标仪检测第二产物信号，根据信号强弱判断待检测核酸的含量。