[发明专利]核酸检测方法

说明书

本发明公开了一种核酸检测方法，包括如下步骤：合成目标核酸或从待测生物样本中获取含目标核酸的待测物；获得捕获有目标核酸的固相支持物；将带有酶标记的特异性抗体加入到抗体稀释液中，滴加到获得的捕获有目标核酸的固相支持物上，孵育，得到第一种固相支持物；将含有酶的底物的检测液滴加到的第一种固相支持物上，所述酶的底物与酶进行化学发光反应或进行显色反应,得到第一产物，用酶标仪检测第一产物信号，根据信号强弱判断待检测核酸的含量。本发明的方法灵敏度高：最低可以检测单个分子的DNA和RNA或低于1pM miRNA，特异性高，抗干扰性强，快速，高通量，操作简单，成本低，可应用于各类核酸检测试剂盒的制备。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种核酸检测方法。

背景技术

目前检测核酸的主流方法是PCR技术、基因芯片和测序技术。其中，基因芯片和测序技术用于大量基因的检测，对仪器、操作人员以及数据分析的要求比较高，且需要其他的实验来验证，普通实验室无法独立完成。PCR技术适合一种或多种核酸的检测，是实验室常用的技术手段，也被广泛地应用于临床上，对多种疾病、细菌感染和病毒感染进行快速诊断。由于PCR技术需要使用引物对核酸序列的其中一个片段进行扩增，所以要求扩增的片段是完整的。若样本中的核酸序列断裂、降解或发生变异，则无法与引物结合，从而导致假阴性结果。尤其是RNA，在一般的环境和运输保存中极易降解，使得PCR容易产生假阴性的结果。另外，很多样本如粪便中含有PCR酶抑制物，会严重影响PCR的扩增效率。因此，PCR技术具有其固有的不确定性。

目前基于杂交捕获进行核酸检测技术有bDNA和HC2两种。

bDNA(branched DNA，bDNA)技术根据固相杂交的原理，采用人工合成的可结合多个酶标记物的分支DNA，在目标核酸序列不扩增的情况下，放大检测信号，从而提高灵敏度，克服了PCR技术中的不确定因素。bDNA方法已经被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于艾滋病毒(HIV)和丙肝病毒(HCV)检测，但是该方法涉及到酶标记探针的合成，价格昂贵，而且耗时长，大约需要16小时。

HC2是美国马里兰州的分子诊断公司Digene(后被Qiagen公司收购)推出的第二代杂交捕获技术，通过将RNA探针与单束DNA杂交，随后利用ELISA化学发光检测RNA和DNA形成的杂交物。基于HC2的人乳头瘤病毒(HPV)检测是目前唯一经美国食品药品监督管理局(FDA)、欧洲CE和中国食品药品监督管理局(SFDA)共同认证的HPV检测技术，准确率高，是公认的HPV DNA检测的金标准。但是，该方法需要合成长链RNA探针，需要两种抗体，步骤复杂，检测成本昂贵。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高灵敏、高通量、操作简便快捷、低成本的核酸检测方法。

本发明的第二个目的是提供第二种核酸检测方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种核酸检测方法,包括如下步骤：

1)合成目标核酸或从待测生物样本中获取含目标核酸的待测物

从GenBank检索到目标核酸，从中选出特异性核苷酸序列，并将一部分序列作为捕获功能引物区5，另一部分序列作为标记功能引物区6；

根据所述捕获功能引物区5的序列，设计合成捕获功能区引物1，捕获功能区引物包括A段和B段，所述A段的序列与捕获功能引物区5的序列互补；

根据所述标记功能引物区6的序列，设计合成标记功能区引物2，标记功能区引物包括C段和D段，所述C段的序列与标记功能引物区6的序列互补；

将氨基修饰的通用引物4通过交联吸附法与固相支持物3结合，形成包被有通用引物的固相支持物；所述通用引物的序列与所述捕获功能区引物1的B段的序列互补；