[发明专利]化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用。本发明从广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的液体发酵培养物中分离出具有抗肿瘤活性的myrothecine H和I，分别如式(I)和式(II)所示。myrothecine H和I为单端孢霉烯类新化合物，对肝癌细胞HepG‑2、乳腺癌细胞MCF‑7、神经胶质瘤细胞SF‑268和大细胞肺癌细胞NCI‑H460的IC₅₀值范围为0.09～9.72μM，具有比较显著的抗肿瘤活性。本发明为研究与开发新型的抗肿瘤药物提供了候选药物，为开发利用广藿香内生真菌资源提供了科学依据。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用。

背景技术

癌症是目前危害人类健康的主要疾病之一。国际抗癌联盟发布的数据表明，2008年，全球有1270万人患癌，死亡人数高达760万。世界范围内因癌症死亡的人数，比艾滋病、疟疾和结核病加起来还要多。如果不采取有效的措施，预计到2030年，每年将出现2600万新增癌症病例，癌症死亡人数将达1700万。我国癌症发生率正处于快速上升时期，每年癌症发病人数约260万，死亡180万。癌症已成为中国城市和农村居民的第一死因，癌症带来的经济负担和对社会发展的不良影响也日益突显。在癌症的三大疗法中，药物治疗占有主要位置。

植物内生真菌(endophytic fungi)是指生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织内，但不对植物组织引起明显病害症状的真菌(Tan RX and Zou WX,2001)。内生真菌物种丰富多样，它们处于植物内部的特殊环境中，能够产生各种结构的次生代谢产物，其化合物的结构类型远远超出其植物代谢产物的范围，容易从中发现新颖结构的化合物，并且具有多种生物活性，因此内生真菌已成为发现新天然活性物质的重要资源，在农业和医药工业中具有重要的应用潜力(施琦渊等，2007)。

广藿香(Pogostemon cablin)为唇形科刺蕊草属植物，是多年生草本，全草药用，是临床上常用的芳香化湿中药。广藿香的梗、或叶供药用，主用于妊娠呕吐、胃气痛及预防流感，为芳香健胃、解热、镇吐剂。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供广藿香内生真菌发现的具有抗肿瘤活性作用的新化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用。

本发明的第一个目的是提供式(I)所示的化合物myrothecine H和式(II)所示的化合物myrothecine I，

本发明的第二个目的是提供化合物myrothecine H和myrothecine I的制备方法，是从广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物中分离制备得到的。

优选，所述的制备方法，包括以下步骤：

a.制备广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后得浸膏；

b、浸膏经C₁₈反相柱层析，用甲醇-水作为洗脱剂，从体积比60:40至100:0梯度洗脱，收集甲醇-水体积比为70:30洗脱下来的馏分Fr3，Fr3经凝胶柱层析Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇体积比1:3作为洗脱剂洗脱，收集流份，然后用TLC薄层层析进行合并，收集TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝1:1v/v展开得Rf＝0.3-0.5的组分Fr3.3，组分Fr3.3再经硅胶柱层析，用正己烷-乙酸乙酯做洗脱剂，从体积比5:1，2:1，1:1，1:2，1:3进行梯度洗脱，收集流份，然后用TLC薄层层析进行合并，收集经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝1:1v/v展开得Rf＝0.4-0.5的组分Fr3.1.1，组分Fr3.1.1经进一步的半制备HPLC，获得化合物myrothecine H和myrothecine I。