[发明专利]一种从桑黄中同时纯化提取类固醇和总三萜的方法

说明书

本发明公开了一种从桑黄中同时纯化提取类固醇和总三萜的方法，该方法采用复合酶酶解、多孔共价有机框架材料COF‑701富集、多频超声辅助提取的工艺，通过优化上样液、洗脱液和超声频率等参数，实现了对桑黄中类固醇和总三萜的同时高效纯化富集。该方法具有稳定性好、选择性高、吸附量大、操作简便可控等优点，可用于各种复杂样品中类固醇和总三萜的纯化富集。

技术领域

本发明涉及一种同时纯化提取桑黄中类固醇和总三萜的方法，属于天然有机化学领域。

背景技术

桑黄是我国一类传统珍稀药用真菌的俗称，具有多种药理作用，如抗肿瘤、抗氧化、提升免疫力等。桑黄的天然子实体内含有丰富的高分子类多糖体，三萜类、蛋白质、矿物质、氨基酸和固醇类等化合物。三萜类化合物具有调节免疫力、抑制癌细胞，调整血压、保护肝脏，降低血脂肪、抗过敏与发炎等多种作用，其药理作用与临床效果深受肯定。固醇类化合物是由胆固醇衍生而来，具有抗发炎，调节体内的钠、钾比例，使其保持恒定，调节血糖含量，避免过高或不足以及调节性功能，同样促进第二性征成熟的作用。目前，对于桑黄多糖的提取、分离纯化研究较多，而类固醇和三萜类化合物的研究较少。

发明内容

本发明的技术任务是为了弥补现有技术的不足，提供一种从桑黄中同时纯化提取类固醇和总三萜的方法，该方法耗时短、成本低、操作简单，具有很好的工业前景。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

(1)将除杂后的桑黄在60℃下烘干后粉碎，过40目筛网，得到桑黄干粉；

(2)向桑黄干粉中加入磷酸氢二钠缓冲液，混合均匀，再按桑黄干粉质量的0.2～1.0％加入复合酶，在45～55℃下酶解30～90分钟，酶解液经离心分离得到上清液和沉淀物；

(3)在步骤(2)中上清液中加入共价有机框架材料COF-701，其添加量为桑黄干粉质量的1％，进行多频超声萃取，经离心分离得到COF-701富集材料；

(4)COF-701富集材料置于离心管中，加入洗脱液，超声振荡1分钟，经离心分离得到上清液和COF-701；上清液经旋转蒸发仪减压浓缩后得到类固醇和总三萜产品。

所述磷酸氢二钠缓冲液,成分为磷酸氢二钠和柠檬酸，pH为4.0～6.0，其添加量为桑黄干粉质量的5～10倍。

所述复合酶，由纤维素酶和葡萄糖氧化酶组成，其中，纤维素酶和葡萄糖氧化酶质量比为3：1～1：3。

所述共价有机框架材料COF-701，由2,4,6-三甲基-1,3,5-三嗪和4,4′-联苯二甲醛在三氟乙酸催化下于150℃聚合得到,比表面积是1715m²g^-1，孔径为1.1nm，在强酸性和碱性条件下可以保持其组成和结晶度，其结构式如下：

所述多频超声萃取，超声频率为20-80kHz，两两组合或三种同时组合，超声处理功率为100-1000W，萃取时间为30-300s。

所述离心分离，在700～2000rpm下离心10～30min。

所述洗脱液，由乙醇、甘油、碳酸二甲酯、柠檬烯、乙酸乙酯中的一种或二种及以上混合；洗脱液添加量为COF-701富集材料质量的2～5倍。

所述超声振荡,超声频率为25kHz，超声处理功率为600W。

所述类固醇和总三萜产品为含有Phellilane L(图1所示1)、Phellidene E(图1所示 2)、Phellinulin D(图1所示3)、Phellinulin I(图1所示4)、Phellinulin K(图1 所示5)、啤酒甾醇(图1所示6)、β-谷甾醇(图1所示7)和齿孔醇(图1所示8)的混合物，提取率为60％-80％。