[发明专利]一种通用型流感病毒抗原蛋白及其制备方法有效
| 申请号： | 202011133005.3 | 申请日： | 2020-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN112409494B | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 王爱萍;张改平;丁培阳;陈玉梅;刘红亮;刘东民;梁超;冯景 | 申请（专利权）人： | 河南中泽生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/145;A61P31/16;B82Y5/00;B82Y40/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 郑州中原专利事务所有限公司 41109 | 代理人： | 张春 |
| 地址： | 450000 河南省郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通用型 流感病毒 抗原 蛋白 及其 制备 方法 | ||
1.一种通用型流感病毒抗原蛋白，其特征在于：猪圆环病毒2型的衣壳蛋白（Cap蛋白）与来源于人、猪和禽的M2e表位蛋白融合表达，为来源于人、猪和禽的M2e表位按照不同的次序与Cap蛋白的羧基端融合串联表达并自组装形成Cap-3M2e的抗原蛋白，所述自组装形成Cap-3M2e的抗原蛋白，具体为下列六种纳米颗粒之一：
①.Cap-G4-hM2e-G4-sM2e-G4-aM2e；
②.Cap-G4-hM2e-G4-aM2e-G4-sM2e；
③.Cap-G4-sM2e-G4-hM2e-G4-aM2e；
④.Cap-G4-sM2e-G4-aM2e-G4-hM2e；
⑤.Cap-G4-aM2e-G4-hM2e-G4-sM2e；
⑥.Cap-G4-aM2e-G4-sM2e-G4-hM2e；
上述六种纳米颗粒由如SEQUENCE 1-6 所示核酸序列编码。
2.一种如权1所述通用型流感病毒抗原蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.将人源、猪源和禽源的M2e表位按照不同的次序与Cap蛋白的羧基端融合串联表达，合成六种Cap-3M2e抗原蛋白；
b.将a中合成的六种Cap-3M2e基因分别插入到pET28a载体，从而构建六种可用于外源蛋白表达的pET28a-Cap-3M2e原核表达载体；
c.将b中构建的六种pET28a-Cap-3M2e原核表达载体转化到大肠杆菌BL21菌株中，从而构建六种pET28a-Cap-3M2e原核表达菌株；
d.将c中获得的六种pET28a-Cap-3M2e原核表达菌株在IPTG存在下进行诱导表达，裂解所述细胞；
e.将d中的裂解上清进行纯化处理后获得六种Cap-3M2e 蛋白形成纳米颗粒。
3.如权利要求1所述的通用型流感病毒抗原蛋白制备的通用型流感病毒纳米疫苗，其特征在于：包括以下步骤限定：
a.将人源、猪源和禽源的M2e表位按照不同的次序与Cap蛋白的羧基端融合串联表达，合成六种Cap-3M2e抗原蛋白；
b.将a中合成的六种Cap-3M2e基因分别插入到pET28a载体，从而构建六种可用于外源蛋白表达的pET28a-Cap-3M2e原核表达载体；
c.将b中构建的六种pET28a-Cap-3M2e原核表达载体转化到大肠杆菌BL21菌株中，从而构建六种pET28a-Cap-3M2e原核表达菌株；
d.将c中获得的六种pET28a-Cap-3M2e原核表达菌株在IPTG存在下进行诱导表达，裂解所述细胞；
e.将d中的裂解上清进行纯化处理后获得六种Cap-3M2e 蛋白形成纳米颗粒。
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