[发明专利]一种通用型流感病毒抗原蛋白及其制备方法

说明书

本发明提供了一种通用型流感病毒抗原蛋白。本发明将PCV2的Cap蛋白与来源于人、猪和禽的M2e表位蛋白融合表达。所述PCV2的Cap蛋白与来源于人、猪和禽的M2e表位蛋白融合表达，为来源于人、猪和禽的M2e表位按照不同的次序与Cap蛋白的羧基端融合串联表达并自组装形成Cap‑3M2e的抗原蛋白。本发明确定了基于M2e表位的通用型流感疫苗的最佳排列次序，并研制最适用于猪的基于M2e表位的通用型流感疫苗；该疫苗能够诱导高水平的PCV2特异性中和抗体，具有成为二价疫苗的潜力；经过优化的基因更适合在大肠杆菌宿主中高效率表达目标蛋白，而且能够满足工业化生产的要求，产量高，成本低。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体来说，本发明涉及一种基于人、猪禽源流感病毒M2e表位的通用型纳米疫苗的制备方法和用途。

背景技术

流感是一种人畜共患性疾病，主要由甲型流感病毒(Influenza A virus, IAV)引起，会造成严重的呼吸道症状，并诱发其他并发症。一百多年来，一共发生了五次全球大爆发的流感疫情，分别是1918年的西班牙流感、1957年的亚洲流感、1968年的香港流感、1977年的苏联流感和2009年的墨西哥猪流感(Neumann et al. 2009; Smith et al. 2009)。其中1918年和2009年的流感病毒含有猪流感(Swine influenza virus, SIV)的基因组成分，1968的香港流感则含有禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)的基因组成分。此外，1976年新泽西猪流感病毒(H1N1)造成了一名士兵死亡，虽然并未造成大规模的流行，但是给整个美国造成了极大的恐慌(Marks et al. 1980)。目前IAV每年在全球造成20-50万人死亡，也给畜牧业造成极大的经济损失。

IAV的基因组由8段负链RNA组成，编码至少12-13种蛋白质(PB1、PB2、PB1-F2、PB1-40、PA、PA-X、HA、NP、NA、M1、M2、NS1和NS2/NEP)。血凝素(Hemagglutinin, HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase, NA)是IAV表面最重要的两种糖蛋白，被用来描述IAV不同分类。IAV有异常高的变异率，这给IAV的控制带来了极大的困难。IAV高度变异的原因主要有两方面，一是其负链RNA在复制过程中的高突变率；二是流感病毒的基因组分节段，因此不同的流感病毒感染同一个宿主细胞时可能会发生基因组的重配，生成新的IAV亚型。更重要的是除人类外，IAV的其他天然宿主还有猪、禽、马、狗等动物 (Nelson et al. 2015)，这意味着这些物种中存在流感基因库。由于人体内通常没有其他物种IAV的抗体，因此一旦IAV跨物种传播将会造成极大的危害。近20年来，在东亚及东南亚国家和地区，H5N1亚型和H7N9亚型禽流感跨越了物种界限，造成了人类死亡，给整个社会蒙上了恐怖的气氛，给养禽业造成了重大打击。因此IAV的防控挑战巨大，虽然已经建立了全球性的流感监测系统，但是流感的变异依然难以捉摸。相对而言，猪流感的监测系统不完备，对流感的变异情况把握不准。因此人类对通用型的猪用流感疫苗的需求极为迫切，这一直是疫苗研发的重点。

目前市场上的流感疫苗主要是灭活疫苗、减毒活疫苗和重组HA蛋白疫苗。用于季节性流感的重组疫苗和灭活疫苗是三价或四价的，通常含有两种甲型流感病毒株(H1N1和H3N2)和一种或两种乙型流感病毒株。但是常规的IAV疫苗只能抵御与疫苗毒株相同或者相近的IAV的攻击。