[发明专利]一种基于时间分辨荧光标记-适配体识别同时检测三种霉菌毒素的方法

权利要求书

1.一种基于时间分辨荧光标记-适配体识别同时检测三种霉菌毒素的方法，其特征在于，所述检测方法为：将时间分辨荧光纳米颗粒分别用生物素化的玉米赤霉烯酮适配体Apt_ZEN、T-2毒素适配体Apt_T-2和黄曲霉毒素B₁适配体Apt_AFB1修饰得到KYF₄:Dy³⁺-Apt_ZEN、KYF₄:Tb³⁺-Apt_T-2与KYF₄:Eu³⁺-Apt_AFB1荧光探针，并使用二硫化钨纳米片作为荧光猝灭剂，在霉菌毒素存在下，检测混合物的荧光信号强度；

所述三种霉菌毒素为玉米赤霉烯酮、T-2毒素与黄曲霉毒素B₁；

所述时间分辨荧光纳米颗粒为KYF₄:Dy³⁺、KYF₄:Tb³⁺与KYF₄:Eu³⁺。

2.根据权利要求1所述基于时间分辨荧光标记-适配体识别同时检测三种霉菌毒素的方法，其特征在于，所述KYF₄:Dy³⁺-Apt_ZEN、KYF₄:Tb³⁺-Apt_T-2与KYF₄:Eu³⁺-Apt_AFB1荧光探针的制备方法具体如下：

步骤1、时间分辨荧光纳米颗粒进行亲和素修饰：将浓度为1mg/mL的时间荧光分辨纳米材料KYF₄:Dy³⁺、KYF₄:Tb³⁺与KYF₄:Eu³⁺溶液分别与戊二醛在室温下避光轻微震荡活化2h，之后除去未反应的戊二醛，接着用PBS至少清洗三次，然后加入浓度为1mg/mL亲和素并在37℃震荡过夜，反应结束后清洗并取固相，得到亲和素修饰的时间荧光分辨纳米材料AV-KYF₄:Dy³⁺、AV-KYF₄:Tb³⁺与AV-KYF₄:Eu³⁺；

步骤2、时间分辨荧光纳米颗粒与适配体结合：将步骤1中制备得到的亲和素修饰的时间荧光分辨纳米材料AV-KYF₄:Dy³⁺、AV-KYF₄:Tb³⁺与AV-KYF₄:Eu³⁺分散于PBS缓冲溶液中，并加入生物素化的适配体Apt_ZEN、Apt_T-2与Apt_AFB1，在37℃摇床中孵育12h，收集固相并用PBS至少清洗三次，最终得到所述适配体修饰的时间分辨荧光纳米颗粒KYF₄:Dy³⁺-Apt_ZEN、KYF₄:Tb³⁺-Apt_T-2与KYF₄:Eu³⁺-Apt_AFB1荧光探针。