[发明专利]一种基于时间分辨荧光标记-适配体识别同时检测三种霉菌毒素的方法

说明书

本发明提供了一种基于时间分辨荧光标记‑适配体识别同时检测三种霉菌毒素的方法，属于纳米材料与分子生物技术领域。本发明具体方法为：将时间分辨荧光纳米颗粒分别用生物素化的玉米赤霉烯酮适配体Apt_ZEN、T‑2毒素适配体Apt_T‑2和黄曲霉毒素B1适配体Apt_AFB1修饰得到KYF₄:Dy³⁺‑Apt_ZEN、KYF₄:Tb³⁺‑Apt_T‑2与KYF₄:Eu³⁺‑Apt_AFB1荧光探针，并使用二硫化钨纳米片作为荧光猝灭剂，在霉菌毒素存在下，检测混合物的荧光信号强度。该发明可以用于玉米、小麦、谷物、饲料及其制品等样品中玉米赤霉烯酮、T‑2毒素和黄曲霉毒素B₁的检测。

技术领域

本发明属于纳米材料与分子生物技术领域。尤其是涉及一种利用时间分辨荧光纳米材料和二硫化钨纳米片结合核酸适配体识别对玉米赤霉烯酮、T-2毒素和黄曲霉毒素B1进行同时检测，特点在于充分利用了时间分辨荧光纳米材料的强荧光和长荧光寿命、二硫化钨纳米片的高荧光猝灭效率以及核酸适配体对靶标的高亲和力和特异性，有效避免了样本生物背景荧光干扰，提高了检测的灵敏度及准确性，并能同时正确识别三种霉菌毒素。

背景技术

霉菌毒素是真菌生长过程中自然产生的化学代谢产物，被认为是最重要的慢性饮食危险因素。从农场到餐桌的任一阶段都有可能发生霉菌毒素污染。霉菌毒素常常侵害肝脏、肾脏、大脑神经系统等器官，产生肝硬化、肝炎、肝细胞坏死、肝癌、急慢性肾炎、大脑中枢神经系统的严重出血、神经组织变性等症状。因此，定期监测这些霉菌毒素至关重要。玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)对动物具有较强的生殖发育毒性和免疫毒性，可引起动物雌激素亢进症，导致不孕、不育、胎儿畸形和生长发育不良。T-2毒素(T-2toxin)毒性极为广泛，主要破坏分裂迅速、增殖活跃的组织器官，可导致多系统、多器官的损伤，尤其骨髓、胸腺等淋巴组织受损最为严重。黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是最具毒性和最主要的真菌毒素，在食品中的污染最为广泛，对食品安全性的影响最大，国际癌症研究所(International Agencyfor Research on Cancer，IARC)将AFB₁列为Ⅰ类致癌物。因上述霉菌毒素对人类健康均具有极强破坏性和毒性，并常共存于谷物中，因此，迫切需要开发一种灵敏、快速且易于使用的检测策略来定量测定食品中的多种霉菌毒素。

目前，霉菌毒素检测方法主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相质谱联用法(HPLC-MS/MS)及基于抗原-抗体免疫识别建立的免疫法等。薄层层析法操作步骤较繁琐，灵敏度及特异性低，已不能满足现代检测的需要。而常用的色谱分析法，样品前处理方法复杂、繁琐，且需要熟练掌握仪器操作技术，不便基层推广。免疫法检测霉菌毒素虽具有灵敏度高、特异性强等优点，但是小分子抗原的制备过程繁琐耗时、成本昂贵，不同批次间抗体存在差异性，储存及使用条件严苛，导致假阳性率高、重复性差。所以开发一种快速方便、稳定性好、灵敏度高、特异性强、成本低廉的检测方法很有必要。