[发明专利]一种降低单细胞扩增偏倚性的离体组织细胞核分离方法

权利要求书

1.一种提取细胞核的方法，其特征在于，所述方法的步骤包括：

1)在二号缓冲液(LB)中进行样品机械裂解处理，经过冰置处理和吹打处理后获得裂解产物；

2)将所述裂解产物进行第一过滤处理及第一离心处理，获得第一离心细胞核沉淀；

3)将所述第一离心细胞核沉淀并在第一缓冲液(WB)中进行及冲洗第一重悬处理和第二过滤处理，然后进行第二次离心处理，获得第二离心细胞核沉淀；

4)将所述第二离心细胞核沉淀在三号(NB)缓冲液中进行第二重悬混匀处理后进行第三过滤处理，获得的细胞核悬液，所述细胞核悬液在单细胞全基因组测序和扩增均一性检测前，进一步将细胞核进行重悬处理，经过重悬处理后，所述细胞核的浓度为1000核/μL；

其中，所述样品为离体样本；

所述一号缓冲液(WB)包括：10-20mM Tris-HCl(pH 7.5-7.8)，10-20mM NaCl，50-100mMKCl，2-10mM MgCl₂，5-15mM CaCl₂，0.04％BSA，1mg/mL PI以及0.2U/μL RNase抑制剂；

所述样品与所述一号缓冲液(WB)的质量体积比为5mg:0.5mL；

所述二号缓冲液(LB)为一号缓冲液(WB)含0.2％NP-40(质量体积比)；

所述三号缓冲液(NB)为含1％FBS，1mM DTT的D-Hanks缓冲液；

使用前，所述一号缓冲液(WB)，所述二号缓冲液(LB)以及所述三号缓冲液(NB)预先经过4℃预冷处理；

步骤1)中破碎处理后的所述样品体积≤0.2mm³；

步骤1)中所述冰置处理时间为8-10min并利用移液枪混匀，步骤1)中所述吹打处理为10-15次；

步骤2)中所述第一离心处理是在4℃、500g的条件下进行5min；

步骤3)中第二过滤处理是通过直径为40μm的细胞过滤器进行；

步骤4)中第二过滤处理是通过直径为40μm的细胞过滤器进行。

2.如权利要求1所述的一种提取细胞核的方法，其特征在于，步骤1)中使用研磨杵进行所述机械裂解处理。

3.如权利要求1所述的一种提取细胞核的方法，其特征在于，步骤2)中所述第一过滤处理是通过直径为70μm的细胞过滤器进行。

4.如权利要求1所述的一种提取细胞核的方法，其特征在于，步骤2)中所述第一离心处理是在4℃、500g的条件下进行5min。

5.如权利要求1所述的一种提取细胞核的方法，其特征在于，步骤3)中所述第一重悬处理中一号缓冲液(WB)的用量为0.5mL。

6.如权利要求1所述的一种提取细胞核的方法，其特征在于，步骤4)中所述第二离心细胞核沉淀在0.2mL的所述三号缓冲液(NB)进行所述第二重悬混匀处理。