[发明专利]一种用于构建噬菌体抗体库的噬菌粒载体构建方法及抗体筛选方法在审
| 申请号： | 202011140035.7 | 申请日： | 2020-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN112226417A | 公开（公告）日： | 2021-01-15 |
| 发明（设计）人： | 赵博;李新宇;王亚楠;王步帆;李贞 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/63;C12N15/13;C07K16/28 |
| 代理公司： | 上海光华专利事务所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 许亦琳;余明伟 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 构建 噬菌体 抗体 噬菌粒 载体 方法 筛选 | ||
1.一种基于噬菌体展示技术的用于筛选抗体的噬菌粒，其特征在于，所述噬菌粒为外壳蛋白PIII编码基因与目的基因插入位点之间含有牛凝血酶酶切位点的丝状噬菌粒。
2.根据权利要求1所述的噬菌粒，其特征在于，所述牛凝血酶酶切位点为SEQ ID NO.4所示肽链的编码基因。
3.根据权利要求1所述的噬菌粒，其特征在于，所述噬菌粒载体中目的基因插入位点可替换插入其它目的基因。
4.根据权利要求3所述的噬菌粒，其特征在于，所述目的基因为BCMA-scFv或者B7-H3-scFv的编码基因。
5.根据权利要求1所述的噬菌粒，其特征在于，所述噬菌粒中还含有标记基因。
6.如权利要求1-5任一项所述的噬菌粒用于筛选抗体的用途。
7.如权利要求1-5任一项所述的噬菌粒用于筛选抗体的方法，所述方法包括：利用含有牛凝血酶酶切位点的丝状噬菌粒筛选抗体。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
a.构建含有标记基因、目的基因、牛凝血酶酶切位点的丝状噬菌粒；
b.将噬菌粒转入宿主细胞制备表面展示目标抗体噬菌体；
c.通过噬菌体表面展示抗体与抗原结合、非特异性洗涤、加入牛凝血酶洗脱特异性结合噬菌体的筛选方式富集目标抗体。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述筛选轮次为一次。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述洗脱时无需使用硫酸、盐酸或者氢氧化钠。
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