[发明专利]一种脆性X综合征检测试剂盒

说明书

一种脆性X综合征检测试剂盒，以达到检测速度快、准确度高的效果。本发明采取的技术方案是，提供一种脆性X综合征检测试剂盒，包括引物组、PCR反应液、Taq酶、脆性X综合征标准品、阴性对照样品；所述引物组包括用于扩增包含CGG重复区域、5’侧翼区和3’侧翼区的区域的第一引物对，用于扩增CGG重复区域和5’侧翼区的区域的第一引物组合，以及用于扩增CGG重复区域和3’侧翼区的区域的第二引物组合。本发明的试剂盒用于大样本量包括男性和女性快速筛查脆性X综合征位点FMR1的CGG重复数目，该方法可应用于脆性X遗传检测、产前诊断和胚胎移入前诊断。试剂盒具有快速、高通量、样本量少、价格低、且操作简单，易上手。

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，具体涉及一种脆性X综合征检测试剂盒。

背景技术

脆性X综合征(fragile X syndrome，FXS)是最常见的遗传性智力低下疾病之一，发病率男性约1/4000，女性约1/6000(1/5000-1/8000)，在智力低下人群中仅次于唐氏综合征。脆性X综合征发病的分子遗传学基础是脆性X智力低下基因1(Fragile Xmentalretardation gene 1，FMR1，OMIM:309550，位于Xq27.3)的5’端非翻译区(CGG)n三核苷酸重复序列异常扩增以及启动子区CpG岛的甲基化，但两者之间的关系尚不明确。95％以上的FXS患者因CGG重复机制引起发病，同时还有5％以下的FXS患者则是由FMR1基因的错义突变和缺失型突变影响了FMRP的正常结构和功能，而导致FXS。

95％以上的FraX患者，其发病的分子遗传学基础是脆性X综合征智力低下基因1(FMR-1基因)(CGG)n结构扩展突变，5％以下则是由FMR1基因的错义突变和缺失型突变影响了FMR1基因的正常结构、功能所导致。

FMR1基因(CGG)n重复序列异常扩增具有高度多态性，中国内地正常人CGG重复数为5～50次。FMR1基因的(CGG)n重复有4种类型：正常型小于54次、前突变型55～200次、全突变型大于200～230次、以及CGG重复数在55～200次者的前突变携带者，男性可伴有智力低下，女性往往表现为智力正常，但其子女发生FXS的风险明显增加。当CGG重复超过200时，FMR1基因CpG岛常发生甲基化，FMR1转录受抑制或减弱，其编码产物脆性X智力低下蛋白(fragile X mental retardation protein，FMRP)表达缺陷或减少，导致突触可塑性改变，影响神经元和树突的发育及正常功能，进而引发一系列复杂的临床精神症状。

也有报道指出，脆性X综合征前突变女性携带者(而非全突变)似乎是40岁前绝经的一个风险因素。那些过早出现卵泡刺激素升高的不育女性可能是FMR1基因前突变携带者的候选筛查人群；女性携带者的CGG重复数大于55但小于80时，CGG重复数越大，女性发生卵巢早衰的年龄越小；CGG重复数大于79时发生POF的风险明显增高；然而CGG重复数大于或等于100时卵巢早衰风险似乎不再增加或者反而下降，但准确的CGG重复数阈值仍然未知。前突变男性携带者50岁后显现脆性X相关震颤/共济失调症，其多系统神经异常主要为进行性紧张震颤、共济失调、帕金森病、认知能力减退和自身免疫缺陷病等。

现有脆性X综合征检测技术中，依据FMR1基因突变的特点，已建立了多种有效的实验室诊断方法，诸如Southern杂交、甲基化特异性PCR、免疫细胞化学方法等。常用Southernblot结合PCR完成其诊断。Southern blot法是主要确诊方法，但对CGG重复数较少的携带者或嵌合体可能漏诊，酶解不完全时则可能误诊。而且该法费用昂贵，费时费力，需要大量DNA，有放射性危害，不适合基层大范围筛查。

常规PCR法检测，检测方法复杂，步骤繁多，且检出准确率低，临床参考性低。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种缺陷，提供一种脆性X综合征检测试剂盒，以达到检测速度快、准确度高的效果。