[发明专利]杨树2n花粉的诱导和分离纯化方法

说明书

本发明公开了杨树2n花粉的诱导和分离纯化方法。包括：(1)用秋水仙碱诱导杨树花粉染色体加倍得到包括2n花粉在内的混合花粉；(2)将混合花粉用过滤器过滤进行初步筛选；(3)将虹吸孔管与显微操纵器相连接；(4)将过滤后的花粉液滴于载玻片上，配套使用倒置显微镜、显微操纵器和虹吸孔管将2n花粉从混合花粉中彻底分离出来。本发明通过优化秋水仙碱诱导杨树花粉染色体加倍条件获得高频率诱导型2n花粉；借助35‑45μm的过滤器将花粉进行过滤初选；再配套使用倒置显微镜、显微操纵器和虹吸孔管将2n花粉与其它单倍性花粉彻底分离；所纯化的2n花粉与单倍性雌配子杂交，避免了因授粉时单倍性花粉的竞争导致三倍体得率低的问题。

技术领域

本发明涉及2n花粉的诱导和分离纯化方法，尤其涉及杨树2n花粉的诱导和分离纯化方法，属于杨树2n花粉的诱导和分离纯化领域。

背景技术

自1936年瑞典Nilsson-Ehle发现的巨型欧洲山杨被证明为天然三倍体以来(Nilsson-Ehle H.Note regarding the gigas form of Populus tremula found innature.Hereditas,1936,21:372-382)，三倍体育种已成为杨树遗传改良的重要方法，日益受到树木育种学家们的重视。现已在欧洲山杨、美洲山杨、银白杨、香脂杨以及毛白杨等树种中均发现了天然杨树三倍体的存在(Nilsson-Ehle H.Note regarding the gigas formof Populus tremula found in nature.Hereditas,1936,21:372-382；Tamm Yu A andYarvekyulg L.Results of searches for triploid aspen in Estonia.Lesovedenid,1975,6:19-26；Every A D and Wiens D.Triploidy in Utah aspen.Madrono,1971,21(3):138-147；Dillewijn C Van.Cytology and breeding of Populus.Ned.Boschb.–Tijdshr,1939,12:470-481；Gurreiro M G.The silvicultural improvement of populus.Publ.Serv.Flor.Aquic.Portugal,1944,11(1/2):53-117；朱之悌,康向阳,张志毅.毛白杨天然三倍体选育研究.林业科学,1998,34(4):22-31)。近年研究发现，‘I-214’、‘中林46’、‘沙兰杨’、‘廊坊3号杨’、‘武黑1号’、‘辽河杨’等一些在中国广泛栽培的著名杨树品种实际上都是来源于天然2n花粉的三倍体(张守攻,陈成彬,韩素英.中国部分杨属植物的染色体数目.植物分类学报,2005,43(6):539-544；Zhang S G,Qi L W,Han S Y.A report oftriploid Populus of the section Aigeiros.Silvae Genetica,2004,53(2):69-75)。因此，利用天然2n花粉与单倍性雌配杂交是获得杨树三倍体最为直接有效的方式。但由于杨树天然2n花粉的发生频率低，致使三倍体的筛选鉴定工作量大，且三倍体得率低于0.1％。