[发明专利]一种基于微滴式数字PCR技术的三七粉精准定量方法有效
| 申请号： | 202011142832.9 | 申请日： | 2020-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN112322766B | 公开（公告）日： | 2022-05-24 |
| 发明（设计）人： | 陈颖;于宁;张九凯;邢冉冉;邓婷婷;王娉 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京天盾知识产权代理有限公司 11421 | 代理人： | 宋凌林 |
| 地址： | 100176 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 微滴式 数字 pcr 技术 三七 精准 定量 方法 | ||
1.一种基于微滴式数字PCR技术的三七粉精准定量方法，其特征在于，以三七单拷贝核基因所设计的引物和探针组合物，建立三七粉质量与DNA浓度、DNA浓度与基因拷贝数关系，以DNA浓度为中间量构建基因拷贝数和三七粉质量关系，进而测定三七粉含量；所述单拷贝核基因为甘油二酯激酶基因1（diacylglycerol kinase 1 gene，DGK1），所设计的引物和探针如下：其中上游引物为Panax notoginseng -F：AGACCTATCATGATGATTACTCTTCC；下游引物为Panax notoginseng -R：GAATAGGAGTATGGAAACAGGTAAGAC；探针为Panax notoginseng -P：TACCAATCCCAGCGTA，其中探针的5’端连接有一个荧光报告基团FAM，3’端连接有一个荧光淬灭基团MGB。
2.根据权利要求1所述的三七粉精准定量方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
（1）将三七主根打粉，过筛，制得三七粉；提取不同梯度质量三七粉的基因组DNA，并测定DNA浓度，建立三七粉质量与DNA浓度的线性关系；
（2）将权利要求1中的引物和探针组合物加入不同梯度浓度三七粉DNA的反应体系中，进行微滴式数字PCR检测，建立DNA浓度与DNA拷贝数的线性关系；
（3）根据步骤（1）与步骤（2）建立的线性关系，以DNA浓度为中间量，建立三七粉质量与DNA拷贝数的线性关系。
3.根据权利要求2所述的三七粉精准定量方法，其特征在于，所述步骤（2）中，退火温度为56-60℃。
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