[发明专利]一种毛细管96孔板的血浆游离DNA建库方法

权利要求书

1.一种毛细管96孔板的血浆游离DNA建库方法，其特征在于：包括以下步骤：

96孔板以横向十二孔为工作流形成八条工作流，或以纵向八孔为工作流形成十二条工作流；每工作流取前五孔作为反应池，反应池依次为样品池、末端修复与加A反应池、接头连接反应池、恒温扩增反应池、扩增产物回收池；

样品池的内含物为空，用于加样；

末端修复与加A反应池的内含物为完成文库构建过程中末端修复与加A反应的必要成分(buffer、酶mix、dNTP等)组成的反应混合物；

接头连接反应池的内含物为完成文库构建过程中连接接头反应的必要成分(buffer、酶mix、文库接头等)组成的反应混合物；

恒温扩增反应池的内含物为完成文库构建过程中文库扩增反应的必要成分(buffer、酶mix、index引物等)组成的反应混合物；

扩增产物回收池用于回收反应产物；

将反应物加入样品池内，将盖板盖于孔板上，使电极置于反应池内，对反应池上的电极依次通电，利用毛细管电泳原理使样品依次通过样品池、末端修复与加A反应池、接头连接反应池、恒温扩增反应池、扩增产物回收池，从而获得cfDNA文库。

2.根据权利要求1所述一种毛细管96孔板的血浆游离DNA建库方法，其特征在于：样品池的最大加样体积为200μL；加入的样品类型为血浆、血清、细胞积液、灌洗液。

3.根据权利要求1所述一种毛细管96孔板的血浆游离DNA建库方法，其特征在于：所述扩增方式采用恒温PCR的方式进行文库扩增。

4.一种用于血浆游离DNA建库的毛细管96孔板，其特征在于：包括孔板(1)、盖板(2)、注胶孔(3)、毛细管(4)、反应孔(5)、电极(6)；所述孔板(1)上间隔地设置有多组反应孔(5)；同一横排方向的反应孔(5)通过横向毛细管(4)连通，横向毛细管(4)通过竖向毛细管(8)连通；所述注胶孔(3)固定安装在竖向毛细管(8)的通路上；所述盖板(2)活动盖设在孔板(1)上表面，盖板(2)侧面固定安装有多组电极(6)，其中，当孔板(1)和盖板(2)相对时，盖板(2)上每组电极(6)放置于孔板(1)上反应孔(5)内；孔板(1)上还包括多组辅助电极孔(7)，每组单独地固定安装在孔板(1)的端部一侧，每一组均与竖向毛细管(8)相连通。

5.根据权利要求1所述孔板内毛细连续反应装置，其特征在于：所述孔板(1)上的反应孔(5)在排布结构上设置为96孔板结构，其中十二组横排，一排八组反应孔。

6.一种用于血浆游离DNA建库的毛细管96孔板，其特征在于：

96孔板以横向十二孔为工作流形成八条工作流，或以纵向八孔为工作流形成十二条工作流；每工作流取前五孔作为反应池，反应池依次为样品池、末端修复与加A反应池、接头连接反应池、恒温扩增反应池、扩增产物回收池；

样品池的内含物为空，用于加样；

末端修复与加A反应池的内含物为完成文库构建过程中末端修复与加A反应的必要成分(buffer、酶mix、dNTP等)组成的反应混合物；

接头连接反应池的内含物为完成文库构建过程中连接接头反应的必要成分(buffer、酶mix、文库接头等)组成的反应混合物；

恒温扩增反应池的内含物为完成文库构建过程中文库扩增反应的必要成分(buffer、酶mix、index引物等)组成的反应混合物；

扩增产物回收池用于回收反应产物。