[发明专利]一种洋橄榄叶素衍生物的制备方法

权利要求书

1.一种洋橄榄叶素衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

所述洋橄榄叶素衍生物具有式I所示的结构：

式I中，R为甲基或乙基；

(1)将吸水链霉菌LP-93进行种子培养，得到LP-93种子液；

(2)将所述LP-93种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，调节得到的发酵液的pH值至3，离心分离，将所得沉淀物风干后粉碎，得到LP-93发酵干菌体粉；

所述发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：天然氮源2～4％，碳源2～4％，硫酸铵0.3～0.6％，磷酸二氢钾0.3～0.6％，碳酸钙0.2～0.5％和余量水；

所述LP-93种子液的接种量占所述发酵培养基体积的5～20％；

所述发酵培养的温度为25～28℃，时间为72～96h；

(3)将所述LP-93发酵干菌体粉进行乙醇提取，将所得提取液浓缩，得到的浓缩物用甲醇溶解后过滤，将所得滤液浓缩，得到LP-93菌丝体提取物；(4)将所述LP-93菌丝体提取物与乙酸乙酯混合，得到可溶部分F1；

所述LP-93发酵干菌体粉的质量和乙醇的体积之比为1g：(8～15)mL；

所述提取为超声提取，所述提取的次数为2～3次，每次提取的时间为1.5～2.5h；

(5)将所述可溶部分F1进行硅胶柱色谱分离，依次得到组分F1-1～F1-20；将其中的组分F1-15进行C₁₈HPLC分离，得到R为甲基的洋橄榄叶素衍生物；

或将其中的组分F1-18进行RP-HPLC分离，得到R为乙基的洋橄榄叶素衍生物；

所述硅胶柱色谱分离采用梯度洗脱方式，所述梯度洗脱为采用二氯甲烷和甲醇体积比为50:1、25:1、12.5:1、6.25:1和1:1的洗脱剂依次进行洗脱；

所述C₁₈HPLC分离采用的流动相为第一甲醇水溶液，所述第一甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为92:8；

所述RP-HPLC分离采用的流动相为第二甲醇水溶液，所述第二甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为91:9。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述种子培养的温度为25～28℃，时间为48～72h。