[发明专利]一种室温稳定的单组分TMB显色液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种室温稳定的单组分TMB显色液，包括以下组分：聚乙烯醇0.001g/L‑20g/L，阿拉伯糖0.16g/L‑30g/L，柠檬酸1mM‑100mM，乙二胺四乙酸二钠1mM‑20mM，30％过氧化氢水溶液1mM‑10mM，TMB 1mM‑3mM，DMSO 20ml/L‑30ml/L，Proclin300 0.04％，磷酸氢二钠1mM‑25mM，超纯水定容至1L。所述单组分TMB显色液采用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液，且缓冲液的pH值为3.1‑3.6。所述聚乙烯醇为1788低粘度型聚乙烯醇，且聚乙烯醇的聚合度为1700，醇解度为88％。一种室温稳定的单组分TMB显色液的制备方法，包括以下步骤：步骤一：试剂母液配制：1.1：50g/L低粘度聚乙烯醇1788配制：准确称取5g 1788低粘度型聚乙烯醇于烧杯中，加入适量超纯水，置于65℃恒温水浴锅中，通过玻璃棒持续搅拌使颗粒分散均匀，溶解后继续保温2小时，超纯水定容至100ml，使用0.45μm滤膜过滤。

技术领域

本发明涉及TMB显色液技术领域，尤其涉及一种室温稳定的单组分TMB显色液及其制备方法。

背景技术

在酶联免疫吸附测定试验(ELISA)中，辣根过氧化物酶(HRP)催化过氧化物分解，释放出氧气，将显色液底物氧化，溶液变蓝。加入强酸后终止反应，蓝色溶液变黄，在450nm处有最大吸收峰，通过测量该吸光度值，结合标准曲线显色情况，便可定量计算出被检测物的含量。

常用的显色液底物有邻苯二胺(OPD)，2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)及3,3',5,5'-四甲基联苯二胺(TMB)，研究表明，OPD有潜在的致癌性，而ABTS在显色灵敏度上表现不佳，而TMB作为一种新型安全的色原试剂，以显色高效、无毒、不致癌及稳定性好等特点，成为ELISA检测的主流显色剂。

由于TMB易被空气环境中氧气及溶液中过氧化物氧化，所以TMB显色液的生产受到一定限制；当前市售的EILSA试剂盒所采用的TMB显色液大多数为双组分，分为A液和B液，这最大限度的减少了TMB与过氧化物的接触，保证了显色液的稳定性，但该显色液使用时需先预混合，给操作造成不便，同时混合液使用后丢弃，造成一定程度的浪费；市售的ELISA试剂盒也有采用单组分TMB显色液的，但现有单组分TMB显色液存在存储时间短(冷藏于4℃)、显色背景高等问题；在ELISA实际操作中，用户容易忘记将使用后的TMB重新放回4℃存储，导致TMB显色液在室温存储过程中逐步失效。

综上所述，需要一种室温稳定的单组分TMB显色液及其制备方法来解决现有技术中所存在的不足之处。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种室温稳定的单组分TMB显色液及其制备方法，旨在解决上述问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种室温稳定的单组分TMB显色液，包括以下组分：聚乙烯醇0.001g/L-20g/L，阿拉伯糖0.16g/L-30g/L，柠檬酸1mM-100mM，乙二胺四乙酸二钠1mM-20mM，30％过氧化氢水溶液1mM-10mM，TMB 1mM-3mM，DMSO 20ml/L-30ml/L，Proclin3000.04％，磷酸氢二钠1mM-25mM，超纯水定容至1L。

进一步的，所述单组分TMB显色液采用柠檬酸和磷酸氢二钠缓冲液，且缓冲液的pH值为3.1-3.6。

进一步的，所述聚乙烯醇为1788低粘度型聚乙烯醇，且聚乙烯醇的聚合度为1700，醇解度为88％。

一种室温稳定的单组分TMB显色液的配制方法，包括以下步骤：

步骤一：试剂母液配制：

1.1：50g/L聚乙烯醇配制：准确称取5g聚乙烯醇于烧杯中，加入适量超纯水，置于65℃恒温水浴锅中，通过玻璃棒持续搅拌使颗粒分散均匀，溶解后继续保温2小时，超纯水定容至100ml，使用0.45μm滤膜过滤；