[发明专利]刺鮈线粒体基因组全序列的引物设计及其扩增方法

权利要求书

1.刺鮈线粒体基因组全序列引物的设计方法，其特征在于：获取刺鮈近缘物种的线粒体基因组全序列，通过对这些序列进行多重比对，获得相对保守的区域以及变异较大的区域，在相对保守的区域设计相互嵌套引物，即第一对引物的下游引物应在第二对引物的上游引物之后，保证扩增出的产物之间相互重叠。

2.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于：所述刺鮈近缘物种为薄身罗马诺鮈(Romanogobio tenuicorpus)、蛇鮈(Saurogobio dabryi)、犬首鮈(Gobio cynocephalus)、似鮈(Pseudogobio vaillanti)。

3.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于：所述刺鮈近缘物种的线粒体基因组全序列从Genbank数据库中下载获得。

4.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于：所述的相对保守的区域为无突变位点或仅1个突变位点的保守序列区域。

5.根据权利要求1所述的设计方法，其特征在于：相邻引物对之间扩增出的产物序列至少有100bp的重叠区域。

6.刺鮈线粒体基因组全序列引物组，其特征在于，包括二十对引物，其中

第一对引物：

上游引物1如SEQ ID CJ01-F所示：5’-CACTGAAGATGTTAAGATG-3’；

下游引物1如SEQ ID CJ01-R所示：5’-GTCTTCTCGGTGTAAGTGAG-3’；

第二对引物：

上游引物2如SEQ ID CJ02-F所示：5’-GGCTCTAAGGCGCGTACAC-3’；

下游引物2如SEQ ID CJ02-R所示：5’-TCCAGTGTGGGGTTAACGAT-3’；

第三对引物：

上游引物3如SEQ ID CJ03-F所示：5’-AGCACAAGTGTAAACCAGATCG-3’；

下游引物3如SEQ ID CJ03-R所示：5’-GAAGAGGATTTGAACCTCTGGT-3’；

第四对引物：

上游引物4如SEQ ID CJ04-F所示：5’-CTGTAACGCTACTTTTCCTAGT-3’；

下游引物4如SEQ ID CJ04-R所示：5’-TATAAGCCACTCTATCAAAGTG-3’；

第五对引物：

上游引物5如SEQ ID CJ05-F所示：5’-CTTGTATGGAAAAACTTCCT-3’；

下游引物5如SEQ ID CJ05-R所示：5’-GCTTTGAAGGCTCTTGGTCT-3’；

第六对引物：

上游引物6如SEQ ID CJ06-F所示：5’-GCCACAAAAATTAATACCCT-3’；

下游引物6如SEQ ID CJ06-R所示：5’-CCTAAAATTGATGAAACAC-3’；

第七对引物：

上游引物7如SEQ ID CJ07-F所示：5’-CTTTATAGTAATACCAATTCT-3’；

下游引物7如SEQ ID CJ07-R所示：5’-AAATAGGAACATAATTACTGC-3’；

第八对引物：

上游引物8如SEQ ID CJ08-F所示：5’-ACTTGAACAAAAATCCACTT-3’；

下游引物8如SEQ ID CJ08-R所示：5’-CCACAGATTTCAGAGCATTG-3’；

第九对引物：

上游引物9如SEQ ID CJ09-F所示：5’-ACCTAACAATTAAAGCCATAG-3’；

下游引物9如SEQ ID CJ09-R所示：5’-ATGCATGTGCTTGGTGTGCCAT-3’；

第十对引物：

上游引物10如SEQ ID CJ10-F所示：5’-GCCAGTACTAATTATTATCG-3’；

下游引物10如SEQ ID CJ10-R所示：5’-ATGGATACGTAAAGGAATAGT-3’；

第十一对引物：

上游引物11如SEQ ID CJ11-F所示：5’-CAATACCACTTCACATCTGAAC-3’；

下游引物11如SEQ ID CJ11-R所示：5’-AGGTTTAGGTTTTGTAGGCG-3’；

第十二对引物：

上游引物12如SEQ ID CJ12-F所示：5’-CTTGGCCTAATAGGACTAGC-3’；

下游引物12如SEQ ID CJ12-R所示：5’-GGTATTTTTACTAGAAATGC-3’；

第十三对引物：

上游引物13如SEQ ID CJ13-F所示：5’-CATTCCAACCCTAATTATTAT-3’；

下游引物13如SEQ ID CJ13-R所示：5’-GAGGAGGATATAATTAGTGTT-3’；

第十四对引物：

上游引物14如SEQ ID CJ14-F所示：5’-GTACTGCTAATCCTTATGCAC-3’；

下游引物14如SEQ ID CJ14-R所示：5’-GATGTTGAGAAAGCTACAATT-3’；

第十五对引物：

上游引物15如SEQ ID CJ15-F所示：5’-AAGTCGGCCCAATTTGGCCT-3’；

下游引物15如SEQ ID CJ15-R所示：5’-ATGGTTAGGTATGTTTTAATTAT-3’；

第十六对引物：

上游引物16如SEQ ID CJ16-F所示：5’-GGAAGCATTATTGCAGGACTTAT-3’；

下游引物16如SEQ ID CJ16-R所示：5’-CGTTGGCGTGCATGTTACGGAT-3’；

第十七对引物：

上游引物17如SEQ ID CJ17-F所示：5’-ATCGCTAATGACGCACTAGTTG-3’；

下游引物17如SEQ ID CJ17-R所示：5’-ATATGGGTACTATTGCATAATGT-3’；

第十八对引物：

上游引物18如SEQ ID CJ18-F所示：5’-ACTATCTTCTGATAGTAACATGT-3’；

下游引物18如SEQ ID CJ18-R所示：5’-GCGGAGACTTGCATGTGTAAGT-3’；

第十九对引物：

上游引物19如SEQ ID CJ19-F所示：5’-ACATAAGCTTCTGACTTCTC-3’；

下游引物19如SEQ ID CJ19-R所示：5’-AGATGAGTGATCCGATGGAT-3’；

第二十对引物：

上游引物20如SEQ ID CJ20-F所示：5’-CTCTCGTAGCAGATATACTT-3’；

下游引物20如SEQ ID CJ20-R所示：5’-CGTGAAAGAGATAACCAGAT-3’。