[发明专利]提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基及其应用

说明书

本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体涉及提高6‑去甲基四环素发酵效价的补料培养基及其应用，补料培养基的成分与比例为：以质量体积比计，玉米淀粉40‑50％，玉米浆0.1‑0.5％，溴化钠0.1‑0.2％，L‑天冬酰胺0.1‑0.5％，丙二酸二甲酯0.1‑0.2％，氯化钴0.01‑0.05％，α淀粉酶(淀粉用量的W/W)0.4％，消泡剂0.01‑0.03％，剩余为水；在补料培养基中添加促进6‑去甲基金霉素合成的前体物质及促进合成酶的金属离子，使6‑去甲基金霉素的发酵单位提高，提高了生产效率，降低了生产成本。

技术领域

本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体涉及提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基及其应用。

背景技术

米诺环素是目前使用的四环素中作用较强者，抗菌谱与四环素相近，对革兰氏阳性菌包括耐四环素的金黄色葡萄球菌、链球菌和革兰氏阴性菌中的淋病奈瑟球菌均有很强的作用，具有高效广谱，有效剂量低，口服吸收迅速，体内分布广及长效等优点。米诺环素的生产工艺流程的第一步就是以6-去甲基金霉素为原料经高压催化反应生成6-去甲四环素。本发明中6-去甲四环素是通过微生物发酵方法直接大量获得，减少了6-去甲基金霉素的发酵过程和第一步高压催化反应，简化米诺环素合成的步骤，减少设备投资，降低了生产成本。

目前行业内发酵法生产6-去甲四环素的研究较少，研究方向主要有两个：一是中国科学院微生物研究所通过基因工程的手段对金色链霉菌进行改造，产生6-去甲四环素，但是其缺点是改造后菌株的生产能力较低，且副产物含量较多，暂时不具备工业化的条件；二是河北圣雪大成制药有限责任公司直接使用金色链霉菌通过生产工艺的调整进行发酵生产6-去甲四环素，但是其发酵效价较低，也达不到工业化的条件。

发明内容

本发明为了解决上述现有技术中存在的问题，提供了提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基及其应用，能够通过调整发酵培养基和补料培养基的成分和比例，缩短了6-去甲基四环素的发酵周期，提高了生产效率；同时提高了6-去甲基四环素的发酵放罐效价，降低了生产成本。

本发明采用的具体技术方案是：一种提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基，关键是：补料培养基的成分与比例为：以质量体积比计，玉米淀粉40-50％，玉米浆0.1-0.5％，溴化钠0.1-0.2％，L-天冬酰胺0.1-0.5％，丙二酸二甲酯0.1-0.2％，氯化钴0.01-0.05％，α淀粉酶(淀粉用量的W/W)0.4％，消泡剂0.01-0.03％，剩余为水。

一种提高6-去甲基四环素发酵效价的补料培养基的应用，关键是，包括以下步骤：

a、种子培养：将金色链霉素孢子液接种于装有种子培养基的种子罐中，在温度27-29℃、转速300-800rpm、通气量1.0-1.5vvm的条件下培养20-28h，得到种子液；

b、发酵培养：将步骤a中制备的种子液按照体积比20％的接种量接种于装有发酵培养基的发酵罐中，在温度27-29℃、转速300-800rpm、通气量0.8-1.2vvm的条件下进行培养；

c、补料：按照补料培养基配比配制补料罐，待总糖降至3g/100mL时开始流加补料，控制总糖的含量维持在3±0.5g/100mL，同时使用氨水将发酵液的pH控制在6.6-6.8的范围内；

d、培养8天得到发酵液，检测6-去甲基金霉素的发酵效价。

优选地所述的步骤a中种子培养基的成分与比例为：以质量体积比计，玉米淀粉2.5-4.5％，黄豆饼粉1.5-2.5％，酵母浸粉0-1.0％，硫酸铵1-1.5％，轻质碳酸钙0.2-0.5％，溴化钠0.1-0.2％，硫酸镁0.01-0.03％，剩余为水。