[发明专利]一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法

权利要求书

1.一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，包括如下步骤：

（1）建立待测喹诺酮类药物的精确质量数据库和质谱谱库：配置待测喹诺酮类药物的标准溶液，采用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪确定待测喹诺酮类药物的精确质量数据库和质谱谱库；

（2）样品前处理：将饲料用甲酸乙腈溶液提取，提取液经分子印迹整体柱固相萃取并洗脱后得到前处理后的样品；

（3）样品检测：采用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪对前处理后的样品进行检测；

（4）结果分析：将样品检测结果与建立的精确质量数据库和质谱谱库进行对比分析，当检测结果与精确质量数据库和质谱谱库信息匹配时，则确定样品中检测出待测喹诺酮类药物；

步骤（2）中分子印迹整体柱的制备方法为：

A）将4,6,8-三甲基-1H-喹啉-2-酮、5,7-二氯-4-羟基喹啉-3-羧酸、(CH₃COO)₂Zn·6H₂O、甲基丙烯酸、4-乙烯吡啶、三甲基丙烯酸三羟甲基丙烷酯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜及1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐混合，超声溶解5~10min；再加入偶氮二异丁腈，超声振荡10~20min，充氮气5~10min；其中，4,6,8-三甲基-1H-喹啉-2-酮、5,7-二氯-4-羟基喹啉-3-羧酸、(CH₃COO)₂Zn·6H₂O、甲基丙烯酸、4-乙烯吡啶、三甲基丙烯酸三羟甲基丙烷酯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐及偶氮二异丁腈的混合比例为：1mmol：（1~2mmol）:（1~2mmol）：（3~6mmol）：（3~6mmol）：（25~35mmol）：（2~3mL）：（10~15mL）：（20~25mL）：（0.4~0.6g）；

B）将反应后的溶液注入下端封口的不锈钢柱，密封后50~60℃恒温聚合反应18~24h；

C）将反应后的柱子以0.1~1.0mL/min的流速，先用乙腈冲洗5~10min；再用甲醇和乙酸的混合溶液冲洗10~15min，最后用甲醇冲洗3~5min，得到所述分子印迹整体柱。

2.根据权利要求1所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，所述喹诺酮类药物包括氧氟沙星、诺氟沙星、二氟沙星、氟罗沙星、奥比沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星、司帕沙星、洛美沙星。

3.根据权利要求1或2所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，步骤（1）中所述精确质量数据库包括各待测喹诺酮类药物的色谱保留时间及一个前体离子和对待测喹诺酮类药物分别施加不同的碰撞能量后响应强度最高的两个特征碎片离子的精确质量数；质谱谱库包括对待测化合物分别施加不同碰撞能量后产生的二级质谱图。

4.根据权利要求1所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，步骤（1）和（4）中超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪的色谱条件为：色谱柱：C₁₈色谱柱；柱温：29.5~30.5℃；进样量：10μL；流速：0.3~0.35mL/min；流动相：A为0.10~0.15wt%的甲酸水溶液，B为0.10~0.15wt%的甲酸乙腈溶液，洗脱梯度：1~8min，5~95vol%B；8~10min，95vol%B；10~10.01min，95~5vol%B；10.01~13.50min，5vol%B。

5.根据权利要求1或4所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，步骤（1）和（4）中超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪的质谱条件为：毛细管电压为3.4~3.6 kV；离子传输管温度为315~325℃；鞘气压力为38~42arb，辅助气压力8~12arb；扫描模式为全扫描/二级离子扫描，扫描范围为m/z 100～1000；一级质谱分辨率为70000FWHM，二级质谱分辨率为17500 FWHM；轨道阱最大容量为1×10⁶，最大注入时间为100ms；碰撞裂解气为高纯氮气，归一化碰撞能量为17.5 eV、35.0 eV、52.5 eV。