[发明专利]一种双水相萃取纯化核酸酶P1的方法有效
申请号: | 202011158223.2 | 申请日: | 2020-10-26 |
公开(公告)号: | CN112175920B | 公开(公告)日: | 2022-08-30 |
发明(设计)人: | 陈晓春;张磊;汤亦文;李梓阳 | 申请(专利权)人: | 南京工业大学;南京同凯兆业生物技术有限责任公司 |
主分类号: | C12N9/22 | 分类号: | C12N9/22 |
代理公司: | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人: | 肖明芳 |
地址: | 211816 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 双水相 萃取 纯化 核酸酶 p1 方法 | ||
1.一种双水相萃取纯化核酸酶P1的方法,其特征在于,用含有聚乙二醇和核苷酸二钠盐水溶液的双水相混合液从含有核酸酶P1的粗酶液中萃取纯化核酸酶P1;
其中,所述的聚乙二醇分子量为2000~3000;
所述的双水相混合液中,聚乙二醇、核苷酸二钠盐和水的质量百分比为28:32:40。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的核苷酸二钠为鸟苷酸二钠、腺苷酸二钠、肌苷酸二钠、尿苷酸二钠和胞苷酸二钠中的任意一种或几种组合。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的含有核酸酶P1的粗酶液为桔青霉发酵所制得的;其中,所述的桔青霉(Penicillium citrinum)已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC No.2014。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的含有核酸酶P1的粗酶液中核酸酶P1的酶活为4000~6000U/mL。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的双水相混合液与含有核酸酶P1的粗酶液的质量比为0.5~1:1。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将双水相与含有核酸酶P1的粗酶液混合后,调节pH为5.0~8.0,静置,收集上层液相;将上层液相稀释后,用超滤膜超滤,所得截留物即为纯化的核酸酶P1。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的静置为室温静置10min。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的超滤膜为聚醚砜膜,分子量为10~30KDa。
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