[发明专利]来自玉米事件CA09328的核酸分子及其检测方法

说明书

本发明涉及来自玉米事件CA09328的核酸分子及其检测方法，用于检测该核酸分子的引物组、探针及试剂盒，以及产生自玉米事件CA09328的玉米制品。本发明的玉米事件CA09328可稳定表达目的基因且表达量强，全生育期抗玉米螟效果优秀，且具有良好的安全性。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年9月24日提交的申请号为CN202011021485.4、发明名称为“来自玉米事件CA09328的核酸分子及其检测方法”的专利申请的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明总体上涉及植物分子生物学、植物转化、以及植物育种的领域，具体涉及来自玉米事件CA09328的核酸分子及其检测方法。

背景技术

玉米(拉丁学名：Zea mays L.)在世界上很多地区都是主要的粮食作物。通过生物技术改善玉米的农艺性状和品质已有相关研究。其中，如何在玉米中产生昆虫抗性，特别是对玉米螟虫、棉铃虫、黏虫等的抗性，同时对环境不产生有害作用，是一个重要的研究方向。其中，一种实现的方法是通过转基因的方式将特定的昆虫抗性基因在玉米植物中表达从而使玉米植物获得相应的昆虫抗性。例如国际公开号为WO2005059103A1、WO2013169923A1公开的技术等。

然而，外源基因在植物中的表达以及是否能实现抗虫效果受到该基因在植物染色体中的具体位置的影响。具体而言，外源基因在染色体上的位置不同，会对该外源基因是否表达以及相应的表达量也会有很大差异，在表达的空间和时间模式上也可能存在差异，例如不同植物组织之间转基因的相对表达存在差异，这种差异表现在实际的表达模式可能与根据导入的基因构建体中的转录调节元件所预期的表达模式不一致。其原因可能是由于染色质结构(如异染色质)或转录调节元件(如增强子)接近整合位点。因此，为了得到最优的表达，通常需要筛选大量的玉米事件，如此才可能鉴定出可以商业化的事件，即以商业化为目的从大量的事件中筛选出具有目标基因表达量和表达模式的单一事件。具有预期转基因表达量和表达模式的事件可以采用常规的育种方法通过有性异型杂交将转基因渗入到其他遗传背景中，通过杂交的方式产生的后代可以保持原始转化体的转基因表达特征。应用这种策略模式可以确保品种中具有可靠的基因表达，而这些品种能很好地适应当地的生长条件。

因此，鉴定外源基因在基因组中的整合位点对转基因作物的应用具有重要意义。能够检测特定事件的存在以确定有性杂交的后代是否包含目的基因将是有益的。在转基因安全评价中，外源基因在基因组中的整合位点是必须提供的信息。整合位点是通过与插入的转基因DNA相邻的染色体DNA(或基因组DNA)的序列(即，侧翼DNA序列)来表征的。

目前，主要通过PCR技术鉴定分析外源基因的整合位点，包括质粒拯救法、反向PCR(IPCR)法、TAIL-PCR(热不对称交错PCR)法、PCR-walking法等等。TAIL-PCR技术简单易行，反应高效灵敏，产物特异性好，重复性好，应用较为广泛。例如Xu等通过TAIL-PCR方法分离了水稻转基因事件Bt-ZJ22中外源基因整合位点3'端旁侧序列，并根据旁侧序列建立了TaqMan实时定量PCR鉴定方法(Xu J等，Qualitative detection and quantification ofa Cry1A(b)transgene present in rice cv.Zhejing 22,European food research andtechnology,2011,233:259-266)。

对于有性杂交的后代以及用其制备的产品，需要检测其是否包含特定的玉米事件的存在，以便确定有性杂交的后代是否包含目的基因。例如来源于基因重组农作物的食物在投放入市场前需要获得正式批准和进行标记。可以通过多种现有的多核苷酸的检测方法来检测植物中转基因的存在，例如通过聚合酶链式反应(PCR)或者利用多核苷酸探针的DNA杂交。