[发明专利]猪星状病毒2型TaqMan荧光定量PCR试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种猪星状病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括检测猪星状病毒2型ORF1ab保守基因序列的PCR反应液，所述的PCR反应液包括引物对和Taqman探针，所述引物对和TaqMan探针的序列如下：

PAstV2-F：5’-CTGCGCCTACCACCGCGCAGGAGG-3’；

PAstV2-R：5’-CGAGAGTCCTCVAGGAAGTTGTA-3’；

PAstV2-probe：5’-FAM-TACCACCATGTGACCCAGACCTNCCYTTC-3’BHQ1。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的猪星状病毒2型Taqman探针的核苷酸序列的5’端标记FAM荧光报告基团，3’端标记BHQ1淬灭基团。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR反应液还包括2×PrimDirectProbe RT-Qpcr Mix with UNG。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的反应体系为2×PrimDirect Probe RT-Qpcr Mix with UNG 12.5μL，PAstV2-F、PAstV2-R各0.5μL，PAstV2-probe 0.5μL，处理后样本2μL，灭菌水补齐至25μL。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括标准品，所述标准品为猪星状病毒2型阳性样品cDNA扩增片段回收纯化后克隆至pMD18-T中所得，所述标准品浓度为1.4×10⁷copies/μL、1.4×10⁶copies/μL、1.4×10⁵copies/μL、1.4×10⁴copies/μL、1.4×10³copies/μL、1.4×10²copies/μL。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的标准品中目的片段的序列如SEQID NO.1所示。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的反应条件为：90℃3min，56℃5min，为第一步循环；95℃5s，56℃30s，为第二步40个循环，所述第二步每个循环的延伸结束时进行荧光信号检测。

8.一种使用权利要求1所述的试剂盒检测猪星状病毒2型的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

1)样品处理；

2)将上述步骤所得处理后样品直接加到试剂盒的反应体系中，进行荧光定量PCR反应，并同时以标准品作为样品进行荧光定量PCR反应；

3)以标准品Ct值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标做标准曲线，将样品的Ct值代入标准曲线中计算样品的拷贝数。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的样品为粪便。

10.一种如权利要求1所述的猪星状病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒在猪星状病毒2型诊断中的应用。