[发明专利]一种用于表达角鲨烯合成酶的载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种用于表达角鲨烯合成酶的载体，其含有角鲨烯合成酶基因，特别是优化的角鲨烯合成酶基因(SEQ ID NO：9)。

2.根据权利要求1所述的载体，其中，所述载体的序列为SEQ ID NO：8。

3.一种如权利要求1所述的载体的构建方法，所述方法包括以下步骤：

1).构建重组质粒pTYT，

其中，以质粒载体pET-28b(+)为模板并进行反向PCR获得线性化载体片段H1，以质粒载体pRG为模板通过PCR获得片段H2，将H1、H2通过Gibson Assembly方法连接，得到重组质粒pTYT；

2).构建pTYT-hSQS载体，

通过Golden Gate组装将hSQS片段H3(优选SEQ ID NO：9)与重组质粒pTYT连接，得到重组载体pTYT-hSQS。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，在步骤1)中，使用的引物的序列如下：

H1-primer 1：SEQ ID NO：1

H1-primer 2：SEQ ID NO：2

H2-primer 1：SEQ ID NO：3

H2-primer 2：SEQ ID NO：4。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，在步骤1)中，构建的重组质粒pTYT的序列为SEQID NO：7。

6.一种重组菌，其含有权利要求1所述的用于表达角鲨烯合成酶的载体，优选地，所述重组菌中还转入了pMevT和pMBIS质粒。

7.一种通过微生物发酵法生产角鲨烯的方法，其中，所述方法利用如权利要求1所述的载体。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述微生物为大肠杆菌DH10B。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，在所述方法中，当发酵中添加抗生素时，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度为20μM，在不添加抗生素时，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度为100μM。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述大肠杆菌中还转入了pMevT和pMBIS质粒。