[发明专利]胃泌素释放肽前体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种胃泌素释放肽前体化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法，属于试剂盒制备技术领域。该试剂盒包括：链霉亲和素磁颗粒、化学发光标记物标记的胃泌素释放肽前体单克隆抗体和偶联标记的胃泌素释放肽前体单克隆抗体。该试剂盒使用链霉亲和素磁珠‑生物素标记抗体‑吖啶酯标记抗体体系，采用链霉亲和素磁珠与生物素标记的类似物可以牢牢的结合在一起，减少非特异性吸附，提高测试样本的准确度，抗干扰能力强，采用该试剂盒进行ProGRP的检测具有较高的灵敏度和特异性，获得检测结果的准确性更高、时间更短，操作更方便。

技术领域

本发明属于试剂盒制备技术领域，具体涉及一种胃泌素释放肽前体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

胃泌素释放肽(GRP)是由McDonald等在1978年从猪的胃组织细胞中分离出一种具有促胃泌素分泌作用的胃肠道激素，由27个氨基酸组成，是有效的促分泌素或调节肽，广泛分布于哺乳动物的胃肠道、神经系统和肺呼吸道。GRP是正常人脑、胃的神经纤维以及胎儿肺的神经内分泌组织存在的激素。胎儿和新生儿支气管上皮内分泌细胞GRP含量丰富。而在成人，GRP仅存在于神经组织和小部分肺的神经内分泌细胞中，且水平较低。肺癌的癌细胞本身亦可产生并分泌GRP，以自分泌的方式调节自身的生长，并且也可以通过局部弥散的方式与周围的肿瘤细胞膜上相应的受体结合，刺激肿瘤的生长，许多小细胞肺癌细胞株和肿瘤组织分泌的GRP储存在细胞质中的高尔基体内，在适当条件下释放到组织中，与细胞膜上的GRP受体结合，使肿瘤细胞增殖和肿瘤无限生长，低水平GRP即可刺激SCLC细胞DNA合成，因而GRP被认为是SCLC的自主生长因子。但由于GRP很容易被肽链端解酶快速降解，活性部分在血中不稳定，从血浆中直接提取可靠的GRP较困难，因而难以在临床上应用。ProGRP是GRP的前体结构，普遍存在于非胃窦组织、神经纤维、脑和肺的神经内分泌细胞中。ProGRP根据其部分氨基酸的变异可分为3种生物大分子，它们具有共同的C末端序列(31-98)，能够在血浆中稳定表达，ProGRP是GRP基因编码的产物，大量研究证实ProGRP31-98水平能够代表GRP水平和GRP基因表达，是一种新的肿瘤标志物。

胃泌素释放太前体和神经特异性烯醇化酶是与神经内分泌源组织和肿瘤有关的两种分子。胃泌素释放肽前体水平升高见于多种神经内分泌源肿瘤，包括小细胞肺癌、类癌、具有神经内分泌功能的未分化大细胞肺癌、甲状腺髓样癌、其他神经内分泌恶性肿瘤以及具有神经内分泌功能的不依赖雄性激素的前列腺癌亚组。

良性疾病中的胃泌素释放太前体：胃泌素释放太前体血清浓度在2-50pg/mL时为正常。但是肝脏疾病在内的良性疾病(除肾功能不全外)病人中2.5％血清水平高于50pg/mL但小于80pg/mL。

肺癌中的胃泌素释放太前体：胃泌素释放肽前体是SCLC的特异性肿瘤标志物，但其水平身高还可见于一小部分非小细胞癌(NSCLC)病人。这些病人的血清胃泌素释放肽前体浓度明显低于SCLC病人。胃泌素释放肽前体血清浓度与肿瘤浸润成都有关，胃泌素释放肽前体血清浓度＞150pg/mL时提示SCLC的可能性高达93％。

胃泌素释放肽前体对于SCLC灵敏度高，特异性好。不会因溶血出现假阳性结果，是SCLC早期标志物。目前测定胃泌素释放肽前体的方法有放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、化学发光免疫法(CLEIA)等。然而，ELISA发尤其局限性，特异性差、灵敏度低、准确性不高等。放射性免疫方法虽然被认为是准确可靠的方法，但是放射性同位素的辐射影响，废物处理需要专门的实验室，成本高和半衰期短的弊端，已经使该方法逐渐遭到淘汰。

ProGRP化学发光免疫测试剂盒相比传统的检测方法，抗原、抗体的结合是在相似的液体条件下进行，反应过程更简洁、反应迅速灵敏、线性范围更宽以及特异性更好；另一方面，ProGRP化学发光免疫测试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，试剂、样本的添加及检测任务均由仪器自动完成，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度。

发明内容