[发明专利]铜离子诱导的酿酒酵母工程菌及其构建方法

权利要求书

1.一种铜离子诱导的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，包括：

将酿酒酵母菌中的Gal80启动子替换为内源性CTR3或CTR1铜离子抑制启动子，将酿酒酵母菌中的Gal4启动子替换为内源性CUP1铜离子诱导启动子，以便获得重组酿酒酵母菌。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述CTR3铜离子抑制启动子是以酿酒酵母基因组为模板，以核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的CTR3_fwd和核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示的CTR3_rev为引物，经PCR扩增得到。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述CTR1铜离子抑制启动子是以酿酒酵母基因组为模板，以核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的CTR1_fwd和核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示的CTR1_rev为引物，经PCR扩增得到。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述CUP1铜离子诱导启动子是以酿酒酵母基因组为模板，以核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的CUP1_fwd和核苷酸序列如SEQ IDNO:6所示的CUP1_rev为引物，经PCR扩增得到。

5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述CTR3或CTR1铜离子抑制启动子是通过CRISPR/Cas9无痕敲入技术替换酿酒酵母菌中的Gal80启动子。

6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述CUP1铜离子诱导启动子是通过CRISPR/Cas9无痕敲入技术替换酿酒酵母菌中的Gal4启动子。

7.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，还包括将外源蛋白基因的表达载体转化至所述重组酿酒酵母菌，以便获得重组酿酒酵母工程菌。

8.一种铜离子诱导的酿酒酵母工程菌，其特征在于，由如权利要求1-7中任一项所述的构建方法构建得到。