[发明专利]一种杂交瘤细胞株及其应用

权利要求书

1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，其保藏编号为CCTCC NO:C202055。

2.一种番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生，其特征在于，所述单克隆抗体亚型为IgG₁，轻链类型为κ。

3.一种检测试剂盒，该检测试剂盒内包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述检测试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光检测试剂盒中的一种。

4.一种免疫金标速测卡，包括标记垫和与标记垫相搭接的层析膜，其特征在于，所述标记垫含有被胶体金标记的权利要求2所述的单克隆抗体，所述层析膜上的检测线含有番茄斑萎病毒多克隆抗体，所述层析膜上的控制线含有羊抗鼠IgG二抗。

5.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，其制备方法如下：

步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化；

步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体；

步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、克隆化筛选制备得到单克隆抗体细胞株，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠抗番茄斑萎病毒单克隆抗体；

步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免疫金标速测卡。

6.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述标记垫上单克隆抗体的量为5ng-50ng，层析膜上多克隆抗体的量为0.4μg-1.2μg。

7.根据权利要求5所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述步骤1中进行纯化的方法如下：

步骤5、选取病毒目标蛋白合成基因序列，并按照基因序列，合成原核表达载体pET-30a-TSWV，转化BL21与Rosetta；

步骤6、固体平板上挑取pET30a-TSWV单克隆菌落接入LB液体培养基，37℃培养12h-14h；

步骤7、次日，将步骤6中的菌种以1：50接入LB液体培养基，37℃培养至OD＝0.4-0.6，加入IPTG，20℃-30℃诱导表达3h-7h后菌液离心，收集菌体；

步骤8、将步骤7中的菌体进行超声波裂解，收集上清液和沉淀；

步骤9、将步骤8中的上清液利用树脂进行纯化，并用咪唑洗脱，收集洗脱液后透析去除咪唑，得到纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白。

8.根据权利要求4所述的免疫金标速测卡，其特征在于，所述步骤2中多克隆抗体的制备方法如下：

步骤10、将纯化后的番茄斑萎病毒重组蛋白和等体积的弗氏佐剂混合乳化均匀，呈油包水状态，以备免疫兔；

步骤11、将番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，皮下免疫3次，间隔4周，最后经ELISA检测；

步骤12、将免疫兔血清离心后取上清液，在搅拌的条件下加入饱和硫酸铵，继续搅拌后离心，取沉淀后溶于PBS，并透析过夜；

步骤13、将步骤83中的沉淀采用Protein G小柱进行传话，并保持PH呈中性，即得到多克隆抗体。