[发明专利]一种杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提出了一种杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株可分泌番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体用于制备免疫金标速测卡，其方法如下，步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化，步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体，步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、克隆化筛选制备得到该单克隆抗体，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠抗番茄斑萎病毒单克隆抗体，步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免疫金标速测卡，借此，本发明具有可将该免疫金标速测卡应用于番茄斑萎病毒进行快速、现场和灵敏的检测的优点。

技术领域

本发明属于番茄斑萎病毒技术领域，特别涉及一种杂交瘤细胞株及其应 用。

背景技术

番茄斑萎病毒(TSWV)的粒子呈球型，直径约85am，表面包裹有一层膜， 膜外层由突起层组成，突起层厚5nm，几乎连续。该病毒共有4种结构蛋白， 包括：糖蛋白G1，其分子质量为78.0kDa；糖蛋白G2，其分子质量为 58.0kDa；蛋白L，分子质量为200.0kDa；外壳蛋白N，其分子质量为 28.8kDa。粒子重量的20％～30％为脂类，粒子重量的7％为碳水化合物，病毒包裹3分子线形ssRNA，其基因组长约16600nt，核酸占病毒粒子总重量的1 ％～2％，各基因组RNA均由核衣壳蛋白(N)包被，形成拟核衣壳结构，每一 双层膜结构内包被3个核衣壳。大的RNA片段(L)为8897nt，编码RNA聚合 酶(331kD)，小RNA片段(S，2916nt)和中等大小RNA片段(M，4821nt)以 反义方式排列，小RNA编码核衣壳蛋白(30kD)及非结构蛋白(NS)，mRNA的 互补链编码G1和G2的前蛋白和一种非结构蛋白(NS)，病毒链编码运动蛋白 (M，33.6kD)。粗汁液钝化温度为40～46℃(10min)，稀释限点为2×10-3～ 2×10-2，离体病毒的体外存活期为室温下2～5h。

番茄斑萎病毒的寄主范围广泛，包括30多科双子叶植物和7科单子叶植 物的100多种植物可自然感病，汁液接种可传播50多科300多种植物。茄 科、葫芦科、菊科和豆科植物都受害严重。其重要的寄主植物很多，主要经济 作物有烟草、马铃薯、番茄、茄、花生、辣椒等。该病毒同时可感染一些常见 的杂草，如三叶鬼针草、蒲公英等；系统侵染的寄主有番茄、百日草、烟草和 莴苣等；局部侵染的寄主有矮牵牛、心叶烟及黄瓜等。据报道，该病毒能引起 严重的经济损失，番茄斑萎病毒侵染70科900多种植物，包括粮食、烟草、 蔬菜及花卉，因此受到国际植物病理学界的重视。既使是在同一寄主植物上， 因品种、年龄、营养状况和环境条件的不同，番茄斑萎病毒的危害症状也会有 很大差异。

目前常规检测TSWV的方法为PCR，需要专门的实验室场地，需要借助专门 的仪器设备，并且对操作人员要求较高，需要有相当的专业知识、技能和操作 经验，检测过程前处理复杂，所需时间很长。

以侧向流动为检测原理的金标卡检测方法已在很多领域中有过应用，包括 食品安全检测、植物转基因检测等，但针对茄科、豆科、十字花科、菊科和葫 芦科等作物上病毒检测较少。

发明内容

本发明提出一种杂交瘤细胞株及其应用，能够分泌番茄斑萎病毒的单克隆 抗体，并将其应用于检测试剂盒和免疫金标速测卡。

本发明的技术方案是这样实现的：一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为 CCTCC NO:C202055。

一种番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体由杂交瘤细胞株产生，单 克隆抗体亚型为IgG₁，轻链类型为κ。

一种检测试剂盒，该检测试剂盒内包杂交瘤细胞株或所述的单克隆抗体， 所述检测试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶 联免疫试剂盒或荧光检测试剂盒中的一种。

一种免疫金标速测卡，包括标记垫和与标记垫相搭接的层析膜，标记垫含 有被胶体金标记的权利要求2所述的单克隆抗体，层析膜上的检测线含有番茄 斑萎病毒多克隆抗体，层析膜上的控制线含有羊抗鼠IgG二抗。