[发明专利]一种Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法在审
| 申请号： | 202011163466.5 | 申请日： | 2020-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN112126708A | 公开（公告）日： | 2020-12-25 |
| 发明（设计）人： | 罗爱民;邓锐杰;吴茗花;朱小颖 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 宫建华 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 wxc 高粱 rca 鉴别方法 | ||
1.一种Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，其特征在于：采用RCA法检测高粱中代表Wxc型糯高粱的特定核酸序列，所述特定核酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求1所述的Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用CTAB法提取高粱中的基因组DNA；
(2)设计由58个碱基组成、5'端磷酸化的线性DNA模板序列，其碱基序列如SEQ ID NO：2所示；
(3)采用Taq DNA连接酶对高粱中的基因组DNA与线性DNA模板序列进行连接反应；
(4)连接反应结束后，在连接反应的混合液中加入phi29DNA聚合酶缓冲液直接进行RCA反应；
(5)RCA反应结束后，向RCA反应产物中加入荧光染料，然后进行荧光强度检测，具有明显荧光信号的即为Wxc型糯高粱。
3.根据权利要求2所述的Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中，所述Taq DNA连接酶的浓度为10-60units/40μL。
4.根据权利要求2或3所述的Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中，连接反应时间为10-60min。
5.根据权利要求2所述的Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，其特征在于，步骤(4)中，所述phi29DNA聚合酶缓冲液中的聚合酶浓度为10-30units/40μL。
6.根据权利要求2或5所述的Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，其特征在于，步骤(4)中，RCA反应时间为10-60min。
7.根据权利要求2所述的Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，其特征在于，步骤(5)中，所述荧光染料的试剂是THT。
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