[发明专利]一种Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法

说明书

本发明公开了一种Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，本发明属于糯高粱甄选检测技术领域。本发明采用RCA法检测高粱中代表Wxc型糯高粱的特定核酸序列，所述特定核酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明与PCR相比，反应过程简单，RCA不需要昂贵的仪器进行热循环步骤，只需要恒温下就可以进行反应，方便快捷；本发明目的基因(特定核酸序列)与模板的特异性结合提升了反应方法对目标物的特异识别能力，能识别出具有共同特定核酸序列的所有Wxc型糯高粱。

技术领域

本发明属于糯高粱甄选检测技术领域，具体涉及一种Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法。

背景技术

酿酒原料有很多种，其中包括高粱、玉米、大麦、小麦、大米和糯米等，一般优质原料为高粱为主，适当搭配玉米、小麦、糯米、大米等粮食。根据高粱籽粒淀粉结构可分为糯高粱和粳高粱，糯高粱支链淀粉含量高，而粳高粱直链淀粉含量高。糯高粱的籽粒饱满、淀粉含量高，具有黏性好、耐蒸煮、乙醇转换率高、回生程度低等特性，其淀粉结构松软、易于吸水、糖化，且发酵较为彻底、组成的糟醅感观利朗、烤出的酒体醇香自然、绵甜净爽。

由于粳高粱和糯高粱用肉眼很难鉴别，过去粮检时就只能检测高粱的水分、颗粒饱满度、颗粒完善度以及气味。在研究中发现，高粱的糯性和粳性由胚乳中直链淀粉和支链淀粉含量及比例决定的，故而支链淀粉、直链淀粉的含量比例检测也就成了能准确分析粳高粱、糯高粱的有效方法，也因此检测糯、粳高粱的方法又增加了碘染色法、双波长比色法等，仪器简单、操作方便，但是无法通量检测、效率低。

随着生物技术的发展，颗粒结合淀粉合成酶(GBSS)被认为是淀粉合成途径中的关键酶，它直接参与直链淀粉的生物合成，该酶的活性及其表达影响直链、支链淀粉的含量。糯性基因(Waxy或Wx)，又称蜡质基因，蜡质基因是野生型颗粒结合型淀粉合成酶(GBSSⅠ)基因的隐性突变形式，基因突变导致胚乳中直链淀粉和支链淀粉含量及比例发生变化，这也是糯性高粱籽粒形成的根本原因，糯性籽粒因为支链淀粉含量高，可提高淀粉和蛋白质的消化率，被广泛应用在食品加工和酿造产业。因此，有学者通过PCR和qPCR反应来检测糯高粱和粳高粱，方法简单可重复操作，具有高度敏感性，效率高，但是对仪器、操作人员的要求高。

虽说高粱有很多品种，包括金糯梁1号、川南糯红高梁、东北粳高梁、进口的澳洲高粱等，我国北方高粱多为杂交粳高粱，籽粒大，无光泽，无粘性，直链淀粉含量高，单宁含量低；而四川的高粱多为糯高粱，粘性强，籽粒有光泽，支链淀粉含量和单宁含量高；茅台、五粮液、郎酒和泸州老窖等酒厂一直选用当地生产的高粱为酿酒原料，大曲酒特别是浓香型大曲酒的特殊工艺对高梁品种要求高：要求表皮厚、耐蒸煮的糯红高梁，主要品种为红缨子、泸州红、金糯粱6号等。但研究发现，所有糯高粱的糯性基因型只有四种：Wxa、Wxb、Wxc和Wxd，其中大部分市售的糯高粱均为Wxb、Wxc型，最适合酿酒的为Wxc型，在专利公开号为CN107254523A的专利文件中还公开了一种酿酒糯高粱常规种品种或种质纯度鉴定的方法，该方法利用高粱SSR分子标记位点txp36/txp287来鉴定高粱品种/种质纯度，用以进行糯高粱的细分品质选择，但是该方法鉴定的糯高粱品种较少，无法鉴别所有Wxc型糯高粱，存在漏检情况。因此，至今还未能找到一种易大规模推广应用、快速准确检测与鉴别全部Wxc型品种的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，以解决现有酿酒高粱检测技术存在漏检、检测复杂、反应条件要求高、难以大量推广的问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种Wxc型糯高粱的RCA鉴别方法，采用RCA法检测高粱中代表Wxc型糯高粱的特定核酸序列，所述特定核酸序列如SEQ ID NO：1所示。