[发明专利]一种匍匐剪股颖的遗传转化方法

权利要求书

1.一种匍匐剪股颖的遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：将匍匐翦股颖种子消毒处理，通过诱导愈伤，挑选胚性愈伤，继代培养，预培养，经含有目标质粒的农杆菌侵染及共培养后，再经筛选培养、愈伤分化、生根、炼苗及移栽得到抗草铵膦翦股颖植株；

其中，所述目标质粒带草铵膦抗性基因；所述农杆菌侵染时间为30min；

所述种子的消毒处理步骤为：经脱壳后的匍匐翦股颖种子用75%（v/v）酒精浸泡1分钟后，再加入50%（v/v）的84溶液消毒浸泡10分钟；

所述诱导愈伤步骤采用的培养基组成为：4.43g/L MS、30g/L sucrose、500mg/Lcasein hydrolysate、6.6mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、2g/L phytagel，PH＝5.7；

所述继代培养步骤采用的培养基组成为：4.43g/L MS、30g/L sucrose、500mg/Lcasein hydrolysate、6.6mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、8mg/L phosphinothricin、2g/Lphytagel，PH＝5.7；

所述预培养步骤采用的培养基组成为：4.43g/L MS、30g/L sucrose、500mg/L caseinhydrolysate、6.6mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、100μmol/L AS、2g/L phytagel，PH＝5.7；

所述共培养步骤采用的培养基与预培养步骤培养基相同；

所述筛选培养包括第一轮筛选培养和第二轮筛选培养，所述第一轮筛选培养采用的培养基组成为：4.43g/L MS、30g/L sucrose、500mg/L casein hydrolysate、6.6mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、125mg/L cefotaxime、250mg/L carbenicillin、2g/L phytagel，PH＝5.7；

所述第二轮筛选培养采用的培养基组成为：4.43g/L MS、30g/L sucrose、500mg/Lcasein hydrolysate、6.6mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、250mg/L cefotaxime、8mg/Lphosphinothricin、2g/L phytagel，PH＝5.7；

所述愈伤分化步骤采用的培养基组成为：4.43g/L MS、30g/L sucrose、100mg/L myo-inositol、1.0mg/L 6-BA、250mg/L cefotaxime、8mg/L phosphinothricin、2g/LPhytagel；

所述生根步骤采用的培养基组成为：2.2g/L MS、20g/L sucrose、125mg/Lcefotaxime、4mg/L phosphinothricin、3g/L phytagel。

2.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述目标质粒为pCAMBIA3301。