[发明专利]一种匍匐剪股颖的遗传转化方法

说明书

本发明涉及一种匍匐剪股颖的遗传转化方法，涉及利用基因工程培养植物领域。该方法以草铵膦为筛选剂、以带草铵膦抗性基因的目标质粒，成功将草铵膦抗性基因转化到翦股颖植株。本发明实现了匍匐翦股颖草的再生和遗传转化，操作简单易行，通过优化的再生体系，成功将草铵膦抗性基因转化到翦股颖植株，获得了抗草铵膦的阳性株系，促进了匍匐翦股颖的分子育种和遗传改良，以培育更具有市场价值的优良品种。

【技术领域】

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种匍匐剪股颖的遗传转化方法。

【背景技术】

匍匐翦股颖(Agrostis.Stolonifera L.)属于禾本科翦股颖属，是多年生草本植物。在我国东北、华北、西北及江西、浙江等地区均有分布。因其具有较强的耐寒性、耐旱性、耐瘠性、耐荫性、耐修剪性，且叶片细小致密，横向蔓延能力强，被广泛用于运动场草坪和观赏草坪。尽管如此，匍匐翦股颖通常受多种杂草威胁，其中有些杂草竞争性强，侵袭严重时会导致产量大幅下降，以至丧失经济效益。

草铵膦(glufosinate ammonium，phosphinothricin)是由原德国艾格福公司(后归属拜耳公司)在20世纪80年代开发成功的一种广谱触杀型灭生性除草剂。草铵膦属于膦酸类除草剂，能够抑制植物氮代谢途径中的谷氨酰胺合成酶，从而干扰植物的代谢，使植物死亡。

转基因技术是当下育种手段之一，运用该技术对草坪草进行品种改良，可实现目标性状的精准改良。高频再生体系以及高效遗传转化技术体系的建立，将大大促进该物种的分子育种和遗传改良，培育更具有市场价值的优良品种。

然而现有技术中，还没有通过抗草铵膦筛选结合转基因技术对匍匐翦股颖进行遗传转化的成功案例，因此有必要研究一种新型遗传转化方法，以促进匍匐翦股颖的分子育种和遗传改良，培育更具有市场价值的优良品种。

【发明内容】

针对现有技术的不足，本发明提供了一种匍匐剪股颖的遗传转化方法，成功将草铵膦抗性基因转化到翦股颖植株，促进该物种的分子育种和遗传改良。

鉴于此，本发明的目的在于，提出一种匍匐剪股颖的遗传转化方法：以草铵膦为筛选剂，对匍匐剪股颖进行遗传转化。

根据本发明的一个实施例，所述遗传转化具体包括以下步骤：将匍匐翦股颖种子消毒处理，通过诱导愈伤，挑选胚性愈伤并预培养，经含有目标质粒的农杆菌侵染及共培养后，再经筛选培养、愈伤分化、生根、炼苗及移栽得到抗草铵膦翦股颖植株；所述目标质粒带草铵膦抗性基因。

根据本发明的一个实施例，所述目标质粒为pCAMBIA3301。

根据本发明的一个实施例，所述种子的消毒处理步骤为：经脱壳后的匍匐翦股颖种子用75％酒精浸泡1分钟后，再加入50％的84溶液消毒浸泡10分钟。

根据本发明的一个实施例，所述诱导愈伤步骤采用的培养基包含6.6mg/L的2,4-D和0.5mg/L 6-BA。

根据本发明的一个实施例，所述农杆菌侵染时间为30min。

根据本发明的一个实施例，所述筛选培养包括第一轮筛选培养和第二轮筛选培养，所述第二轮筛选培养中草铵膦浓度为8mg/L。

根据本发明的一个实施例，所述愈伤分化步骤采用的培养基包括6-BA，浓度为1.0mg/L。

相比现有技术，本发明的有益效果为：

1.本发明实现了匍匐翦股颖草的再生和遗传转化，操作简单易行，通过优化的再生体系，成功将草铵膦抗性基因转化到翦股颖植株，获得了抗草铵膦的阳性株系，促进了匍匐翦股颖的分子育种和遗传改良，以培育更具有市场价值的优良品种。

2.本发明提供的遗传转化方法愈伤诱导率较高，达到92.3％，优化后抗性愈伤的形成比例达到54.8％，愈伤分化成苗的比例最优达到81.2％。