[发明专利]华佗再造丸HPLC特征图谱及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤a、取槲皮素对照品，用50％v/v～100％v/v甲醇水溶液制成每mL含槲皮素对照品100μg的溶液，作为对照品溶液；

步骤b、取华佗再造丸粉末，用50％v/v～100％v/v甲醇水溶液配成所述华佗再造丸粉末浓度为62.5～250mg/mL的溶液，过滤，取续滤液作为供试品溶液；

步骤c、用高效液相色谱法测定所述对照品溶液和所述供试品溶液，色谱条件为：采用C18色谱柱，流动相采用A相与B相的混合溶液进行梯度洗脱，检测波长为254nm，柱温为25℃～35℃，流速为0.9～1.1mL/min，进样量为5～20μL，理论塔板数按槲皮素峰计算≥20000，其中，所述A相为乙腈，所述B相为0.1wt％～0.3wt％乙酸水溶液；

所述步骤c中所述梯度洗脱的时间及流动相体积比例为：

0～45min，A相：5％～19％、B相：95％～81％；

45～140min，A相：19％～78％、B相：81％～22％；

所述HPLC特征图谱包括12个特征峰，以7号峰槲皮素峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：

1号峰：相对保留时间为0.108±0.0054；

2号峰：相对保留时间为0.183±0.0091；

3号峰：相对保留时间为0.289±0.0144；

4号峰：相对保留时间为0.525±0.0262；

5号峰：相对保留时间为0.543±0.0271；

6号峰：相对保留时间为0.711±0.0355；

7号峰：相对保留时间为1.000±0.0500；

8号峰：相对保留时间为1.088±0.0544；

9号峰：相对保留时间为1.128±0.0564；

10号峰：相对保留时间为1.294±0.0647；

11号峰：相对保留时间为1.343±0.0671；

12号峰：相对保留时间为1.635±0.0817。

2.根据权利要求1所述的华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤c中所述C18色谱柱的内径为4.6mm，柱长为250mm，填料粒度为5μm。

3.根据权利要求1所述的华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤c中所述柱温为30℃。

4.根据权利要求1所述的华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤c中所述流速为1.0mL/min。

5.根据权利要求1所述的华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤c中所述进样量为20μL。

6.根据权利要求1所述的华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤b中所述华佗再造丸粉末溶液的浓度为250mg/mL。

7.根据权利要求1所述的华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述B相为0.2wt％乙酸水溶液。

8.根据权利要求1所述的华佗再造丸HPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤b中所述甲醇水溶液的浓度为100％v/v。

9.权利要求1所述的构建方法构建获得的华佗再造丸HPLC特征图谱在华佗再造丸检测中的应用。