[发明专利]一种普卡那肽的制备方法

说明书

本发明提供了一种普卡那肽的制备方法，涉及多肽合成技术领域。本发明通过FMPB对AM树脂或MBHA树脂进行改性，以H‑Leu‑OtBu作为首氨基酸偶联到改性树脂上，对难连位点氨基酸进行了修饰后再按照普卡那肽主链肽的序列逐步偶联到改性树脂中，大大降低了普卡那线性肽的合成难度，解决了目前合成中杂质多、纯度低、收率低和氨基酸消旋等问题；对序列中4位和12位的Cys进行第一氧化成键后进行柱色谱粗纯化，提高了所得普卡那肽的纯度；纯化液稀释后再进行7位和15位的Cys的第二氧化成键，能够降低预氧化普卡那肽线肽的浓度，从而降低第二氧化成键过程中分子间成二硫键，提高普卡那肽的收率，并且操作简便、适宜工业生产。

技术领域

本发明涉及多肽合成技术领域，具体涉及一种普卡那肽的制备方法。

背景技术

Plecanatide(普卡那肽)由美国Synergy制药公司研发，是尿鸟苷蛋白(uroguanylin)的类似物，含有16个氨基酸的环状多肽，其序列为：Asn¹-Asp²-Glu³-Cys⁴-Glu⁵-Leu⁶-Cys⁷-Val⁸-Asn⁹-Val¹⁰-Ala¹¹-Cys¹²-Thr¹³-Gly¹⁴-Cys¹⁵-Leu¹⁶(两对二硫键：Cys⁴Cys¹²和Cys⁷Cys¹⁵)，具有促尿钠排泄的鸟苷酸环化酶受体激动药的作用，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动和加速排便。

中国专利CN107383170A公开一种普卡那肽的制备方法：(1)在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和Fmoc-Leu-OH偶联得到Fmoc-Leu-树脂；(2)通过固相合成法，按照普卡那肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸；(3)裂解，液相环化；(4)纯化，冻冻干后得到普卡那肽。然而，由于普卡那肽的序列在偶联过程中容易形成树脂缩聚，未对主链上的氨基酸进行修饰，影响普卡那肽的偶联效率，导致线性肽合成难度高、纯度低、收率低。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种普卡那肽的制备方法，本发明提供的制备方法，普卡那肽合成难度小、收率高且纯度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种普卡那肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)将起始树脂、FMPB和缩合试剂混合，进行改性，得到改性树脂；所述起始树脂包括MBHA树脂或AM树脂；

(2)在保护气氛下，将所述改性树脂、H-Leu-OtBu和呋喃类溶剂混合，进行氨醛缩合反应，将所得席夫碱与还原剂混合，进行还原反应，得到H-Leu-OtBu-FMPB MBHA/AM树脂；