[发明专利]二取代PEG化白细胞介素2及其制备方法、应用

权利要求书

1.一种PEG化白细胞介素2，其特征在于，所述的PEG化白细胞介素2中二取代PEG化白细胞介素2含量高于70％；

所述的PEG化白细胞介素2中还含有三取代的PEG化白细胞介素2和一取代的PEG化白细胞介素2；

所述的PEG化白细胞介素2中三取代的PEG化白细胞介素2含量低于20％；

所述的PEG化白细胞介素2中一取代的PEG化白细胞介素2含量低于5％；

所述的PEG化白细胞介素2的制备方法包括：(1)PEG与IL-2反应得到PEG化白细胞介素2粗产物；

(2)凝胶层析过滤去除粗产物中游离白细胞介素2；

(3)将步骤(2)中的产物用α受体柱亲和层析，收集流穿峰组分和洗脱峰组分；

(4)对步骤(3)中的流穿峰组分和洗脱峰组分中的一个或两个分别进行离子交换分离，收集得到PEG化白细胞介素2的组分；

所述步骤(1)中PEG为甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯。

2.权利要求1所述的一种PEG化白细胞介素2，其特征在于，所述的PEG化白细胞介素2中二取代PEG化白细胞介素2含量高于90％。

3.权利要求1所述的一种PEG化白细胞介素2，其特征在于，所述的PEG化白细胞介素2中三取代的PEG化白细胞介素2含量低于10％。

4.权利要求1所述的一种PEG化白细胞介素2，其特征在于，所述的PEG化白细胞介素2中一取代的PEG化白细胞介素2含量低于2％。

5.一种权利要求1所述的二取代PEG化白细胞介素2的制备方法，包括如下步骤：

(1)PEG与IL-2反应得到PEG化白细胞介素2粗产物；

(2)凝胶层析过滤去除粗产物中游离白细胞介素2；

(3)将步骤(2)中的产物用α受体柱亲和层析，收集流穿峰组分和洗脱峰组分；

(4)对步骤(3)中的流穿峰组分和洗脱峰组分中的一个或两个分别进行离子交换分离，收集得到二取代PEG化白细胞介素2的组分；

所述步骤(1)中PEG为甲氧基聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺酯。

6.根据权利要求5所述的方法，所述步骤(1)中PEG为聚乙二醇衍生物，分子量为1-100KDa。

7.根据权利要求5所述的方法，所述步骤(2)中凝胶层析过滤中上样和洗脱流速为0.5-1mL/min，所述的洗脱为PBS溶液洗脱，溶液的浓度为1-10mM。

8.根据权利要求5所述的方法，所述步骤(2)包括：将凝胶层析系统平衡；上样，样品为PEG化白细胞介素2粗产物溶液，控制流速为0.75mL/min；上样完毕后，用洗脱缓冲液，即0.2M HAc和0.2MNaCl溶液洗脱，收集洗脱峰，去除粗产物中游离白细胞介素2。

9.根据权利要求5所述的方法，所述步骤(3)中包括：取α受体亲和柱，上样，样品为步骤(2)得到的产物；上样后，用平衡缓冲液洗脱，收集流穿峰；冲洗完毕后，更换为洗脱缓冲液，洗脱PEG化的IL-2混合物，并收集洗脱峰。

10.根据权利要求9所述的方法，所述步骤(3)上样和洗脱流速为0.1-1mL/min，平衡缓冲液为PBS溶液，洗脱缓冲液为醋酸溶液和氯化钠溶液。

11.根据权利要求9所述的方法，所述步骤(3)中所使用的色谱柱为5mLα受体亲和柱，控制流速为0.45mL/min，平衡缓冲液为5mM PBS，洗脱缓冲液为0.2M醋酸溶液和0.2M氯化钠溶液。