[发明专利]二取代PEG化白细胞介素2及其制备方法、应用

说明书

本发明公开了一种二取代PEG化白细胞介素2的制备方法，包括如下步骤：(1)PEG化IL‑2得到PEG化白细胞介素粗产物；(2)凝胶层析过滤去除粗产物中游离白细胞介素2；(3)将步骤(2)中的产物用α受体柱亲和层析，收集流穿峰组分和洗脱峰组分；(4)分别对步骤(3)中的流穿峰组分和洗脱峰组分进行离子交换分离；(5)收集二取代PEG化白细胞介素2的组分。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体的涉及一种二取代PEG化白细胞介素2及其制备方法和在制备药物中的应用。

背景技术

白细胞介素-2(IL-2)是由植物血凝素(PHA)等分裂原刺激淋巴细胞增殖时产生的。淋巴细胞产生的IL-2作用于表面带IL-2受体的细胞，使细胞增殖而发挥其生物学功能，近来对该因子及其受体的研究日益深入，发现它在细胞免疫、体液免疫及免疫调节中起重要作用，特别是在肿瘤免疫治疗中的作用及临床意义受到重视。

多年前IL-2就被批准治疗肾细胞瘤和转移性黑色素瘤，但商品化药物的应用却受到限制，主要是以下几点：(1)有效率低，单用IL-2的有效率只能达到15-20％左右；(2)IL-2功能双面性，低剂量IL-2促进调节性T细胞的增殖引起免疫抑制，如何调和这两个功能尚待解决；(3)半衰期短，只有几分钟，想要持续起效必须要大剂量给药；(4)不良反应严重，过度激活的免疫系统有可能会攻击自身脏器造成器官衰竭，剂量窗口比较窄。为了提高IL-2的疗效，降低不良反应，已经尝试了各种联用方案，比如IL-2和干扰素，IL-2和淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞疗法，IL-2和化疗等，效果均不理想。

近几年，研究发现在正常的IL-2分子上面添加化学修饰，可以维持IL-2的效果，同时降低使用浓度，也降低副作用。例如，Nektar公司研发出的NKTR-214药物副作用更低，特异性更好，能更高效的激活免疫系统。具体的，是在IL-2分子上添加6个聚乙二醇(PEG)修饰，形成了无活性的药物；给肿瘤患者注射之后，这6个PEG修饰会逐渐脱落，形成有活性的2-PEG和1-PEG的形式。

为解决与IL-2的毒性问题，还有人提出IL-2的某些缀合物，例如CN103517718A公开了一个IL-2部分与一种或多种非肽水溶性聚合物的缀合物，以及制备缀合物的方法。

非专利文献“Relationship ofEffective Molecular Size to SystemicClearance in Rats of Recombinant Interleukin-2Chemically Modified with Water-soluble Polymers”中设计了一种形式的聚乙二醇化IL-2，其中PEG分子与IL-2的伯胺缀合，形成包含有1个IL-2分子和4个PEG分子的蛋白异质混合物。该研究发现，亲水聚合物聚乙二醇的共价附着能够提高IL-2的溶解度，降低血浆清除率，提高了其抗肿瘤能力。

然而，现有技术中缺少能获得较高纯度的二取代PEG化白细胞介素2的方法，也没有含有高纯度PEG化白细胞介素2及其应用的报道。

发明内容

本发明提供一种PEG化白细胞介素2，所述的PEG化白细胞介素2为混合物，包含二取代PEG化白细胞介素2以及选自三取代的PEG化白细胞介素2，四取代的PEG化白细胞介素2或一取代的PEG化白细胞介素2组分中至少两种。

优选的，所述的PEG化白细胞介素2中二取代PEG化白细胞介素2含量高于60％，进一步优选的，高于70％，特别优选的，高于90％。

优选的，所述的PEG化白细胞介素2中还含有三取代的PEG化白细胞介素2和/或一取代的PEG化白细胞介素2。

优选的，所述的PEG化白细胞介素2中三取代的PEG化白细胞介素2含量低于40％，进一步优选的，低于20％，特别优选的，低于10％。