[发明专利]一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法

权利要求书

1.一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用种间BA3 X YNXML F2群体的辣椒苗和自交系或地方种的辣椒苗分别通过单点和重复田间试验，通过田间试验对其进行表型鉴定，获得供试材料抗TSWV的表型数据；

(2)以种间BA3 X YNXML F2群体构建的高密度遗传连锁图谱为基础，结合步骤(1)获得的供试材料抗TSWV的表型数据，对辣椒抗TSWV进行QTL定位，获得抗TSWV的关键QTL位点；同时，以交系或地方种的辣椒构建的SNP基因型数据为基础，结合步骤(1)获得的供试材料抗TSWV的表型数据，对辣椒抗TSWV进行全基因组关联分析，获得抗TSWV的关键SNP位点；

(3)对步骤(2)获得的关键QTL位点和关键SNP位点为基础，通过在辣椒Zunla-1基因组序列上确定区段间及区间内基因分布信息，运用比较基因组学和生物信息学分析方法，筛选具有重要应用价值的单倍型或等位基因变异，同时筛选出决定抗TSWV的关键QTL及基因，并对筛选出的候选基因进行克隆及定量表达分析；

(4)在辣椒抗TSWV全基因组关联分析和连锁分析的基础上，选择5～8个与抗TSWV显著关联SNP/QTL所在的基因组序列，结合选择的基因功能与检测到的抗TSWV的QTL位点，在选择3～5个候选基因，通过PCR重测序的方法寻找基因的多态性位点，最后通过候选基因关联分析的方法检测所寻找到的多态位点与抗TSWV强弱的关系，并针对显著关联位点/QTL位点开发基于PCR的分子标记；其中，所述多态位点与抗TSWV强弱的关系为待检辣椒苗的病害，需要每10天调查一次抗病性待检辣椒苗的病害，并计算辣椒苗抗番茄斑萎病毒的发病率A，一共需要调查2～3次，分抗、感性植株，以最高一次发病率调查结果作为该品种辣椒苗的病情进行统计；发病率A=(该品种感病植株数量/该品种总植株数量)×100%；所述多态位点与抗TSWV强弱的关系通过发病率分为三种，其中发病率A=0为免疫品种，发病率0＜a≤20%为抗病品种，发病率20%＜a≤100%为感病品种；最后利用抗病品种作为PCR的分子标记；

(5)基于步骤(4)确定的分子标记，选育抗番茄斑萎病毒的骨干自交系，最后利用三系法选育抗番茄斑萎病毒的杂交品种。

2.根据权利要求1所述的一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法，其特征在于：所述病害调查采用的方法为血清学检测或分子生物学检测；其中所述血清学检测时，采集抗病性待检辣椒苗植株的叶片利用番茄斑萎病毒试纸条或者番茄斑萎病毒抗体进行ELISA检测，呈阳性则表示为感病植株，反之则为抗病植株；而所述分子生物学检测时，提取植株总RNA，利用番茄斑萎病毒特异性引物进行RT-PCR检测，呈阳性则表示为感病植株，反之则为抗病植株。

3.根据权利要求2所述的一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法，其特征在于：所述病害调查采用的方法还包括症状观察；在症状观察时，感病植株症状包括：系统叶出现坏死斑、皱缩、黄化，植株矮小，发病后期整株坏死。