[发明专利]一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法

说明书

本发明公开了一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法，包括获得供试材料抗TSWV的表型数据；获取抗TSWV的关键QTL位点和抗TSWV的关键SNP位点；对筛选出的候选基因进行克隆及定量表达分析；在辣椒抗TSWV全基因组关联分析和连锁分析的基础上，寻找到的多态位点与抗TSWV强弱的关系，并针对显著关联位点/QTL位点开发基于PCR的分子标记；基于确定的分子标记，选育抗番茄斑萎病毒的骨干自交系，最后利用三系法选育抗番茄斑萎病毒的杂交品种。采用本发明所述的筛选方法，可为辣椒抗病分子育种提供理论和材料支持，并为辣椒新品种选育提供更有效的手段，从而筛选出符合制备优质干辣椒的特色杂交组合，进行推广应用，具有非常显著的经济效益和社会效益。

技术领域

本发明涉及的是农作物育种保护技术领域，具体地说是一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法。

背景技术

辣椒是人们日常生活喜爱的蔬菜作物，栽培普遍而广泛，在辣椒的种植过程中，经常容易发生病虫害。番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus, TSWV）是一种危害农业生产的重要植物病毒，是属于布尼亚病毒科番茄斑萎病毒属病毒的代表种，能侵染70多科1千多种植物，是目前已知寄主范围最广的植物病毒，该病毒在世界上广泛分布，也是北美、欧洲等地辣椒生产的首要病毒，巴西、美国、意大利、澳大利亚、韩国相继报道，给辣椒生产带来巨大损失，严重的时候可以造成绝收。我国近年来也有云南辣椒上发现了番茄斑萎病毒的报道。番茄斑萎病毒是由蓟马专型传播的一种病毒病，我国在2000年前后首次发现西花蓟马，之后西花蓟马在全国范围内流行，目前在广东、海南、广西、云南和贵州露地，以及北方的山东、北京等地温室危害严重。随着西花蓟马的流行传播，番茄斑萎病毒对辣椒的危害有加重的趋势。

由于传毒昆虫西花蓟马流动性大、繁殖快，即使通过改善栽培措施和种植结构，以及化学防治和生物防治相结合的方法，也很难达到明显的防治效果，使得它从发现至今一直是困扰辣椒生产的一大主要难题，深受国内外研究者的关注。从“植物健康管理”角度，选育辣椒抗病毒病品种被认为是最紧迫、最有效和最环境友好的出路，即利用寄主的抗病性是目前防病的最有效途径之一。国内外先后开展了辣椒抗TSWV种质资源的筛选、评价，基于分子标记和相关作图群体（F2）的抗病QTL定位及种质创新等方面的研究。然而，由于研究分散性较强，抗病种质资源主要来自国外科研单位、QTL定位群体不同、缺少共性分子标记、缺少精细定位和基因克隆的群体等因素的影响，严重制约和限制了高抗番茄斑萎病毒辣椒新品种培育的进程。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对背景技术中存在的问题，提供一种筛选方法，利用本发明所述的方法，能够准确反映其对番茄斑萎病毒抗病性，并通过鉴定各品种辣椒苗对番茄斑萎病毒的抗感性，从而选出符合制备优质干辣椒的特色杂交组合物进行推广应用，具体地说是一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种抗番茄斑萎病毒辣椒植株的筛选方法，包括以下步骤：

(1)采用种间BA3 X YNXML F2群体的辣椒苗和自交系或地方种的辣椒苗分别通过单点和重复田间试验，通过田间试验对其进行表型鉴定，获得供试材料抗TSWV的表型数据；

(2)以种间BA3 X YNXML F2群体构建的高密度遗传连锁图谱为基础，结合步骤(1)获得的供试材料抗TSWV的表型数据，对辣椒抗TSWV进行QTL定位，获得抗TSWV的关键QTL位点；同时，以交系或地方种的辣椒构建的SNP基因型数据为基础，结合步骤(1)获得的供试材料抗TSWV的表型数据，对辣椒抗TSWV进行全基因组关联分析，获得抗TSWV的关键SNP位点；

(3)对步骤(2)获得的关键QTL位点和关键SNP位点为基础，通过在辣椒Zunla-1基因组序列上确定区段间及区间内基因分布信息，运用比较基因组学和生物信息学分析方法，筛选具有重要应用价值的单倍型或等位基因变异，同时筛选出决定抗TSWV的关键QTL及基因，并对筛选出的候选基因进行克隆及定量表达分析；