[发明专利]一种适用于中国地区前交叉韧带损伤的基因诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种适用于中国地区前交叉韧带损伤的基因诊断试剂盒，包括PCR反应体系，所述PCR反应体系包含第一引物组和/或第二引物组，所述第一引物组包含如下引物序列：上游引物：5’‑ACGTCACTAAAATAAAATCCTGTCTA‑3’，下游引物：5’‑GAAGCTCCAAGAAACCATCC‑3’；所述第二引物组包含如下引物序列：上游引物COL12‑F1 5’‑GAG AAT CCA GAA CAG CTC CAC CAG‑3’，下游引物COL12‑R1 5’‑CAT GGC TAG TAT GGG ACA G‑3’。本发明提供的适用于中国地区前交叉韧带损伤的基因诊断试剂盒可对中国地区前交叉韧带身上人群进行基因诊断，对于进行ACL患者的诊断、预后和治疗具有重大意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种适用于中国地区前交叉韧带损伤的基因诊断试剂盒。

背景技术

前交叉韧带(anterior cruciate ligament，ACL)是人体膝关节中重要的静力性稳定结构，ACL损伤在膝关节的损伤中较为常见，是引起膝关节功能障碍的常见因素之一。有研究表明内部因素和外部因素共同作用导致前交叉韧带的损伤，ACL损伤中大部分都是由于参加体育活动这种外部因素所致，但是通过对ACL损伤人群进行研究，可以发现，有ACL损伤家族史与没有ACL损伤家族史的人群相比，ACL损伤的发生率明显增加。明确ACL损伤的原因将有助于预防膝关节损伤，但目前ACL损伤发生的病因尚不清楚，因此，寻找与ACL相关的基因位点，探讨ACL的遗传机制，为ACL患者的诊断、预后和治疗提供遗传学依据显得尤为重要。本研究针对ACL相关的基因位点与中国地区ACL损伤的生物学相关性进行了系列实验研究，以提供一种适用于中国地区前交叉韧带损伤的基因诊断试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种适用于中国地区前交叉韧带损伤的基因诊断试剂盒，对中国地区前交叉韧带损伤人群进行基因诊断。

本发明为了实现上述目的具体采用以下技术方案：

一种适用于中国地区前交叉韧带损伤的基因诊断试剂盒，包括PCR反应体系，所述PCR反应体系包含第一引物组和/或第二引物组，所述第一引物组包含如下引物序列：

上游引物：5’-ACGTCACTAAAATAAAATCCTGTCTA-3’；

下游引物：5’-GAAGCTCCAAGAAACCATCC-3’；

所述第二引物组包含如下引物序列：

上游引物COL12-F1 5’-GAG AAT CCA GAA CAG CTC CAC CAG-3’；

下游引物COL12-R1 5’-CAT GGC TAG TAT GGG ACA G-3’；

更进一步地，所述第二引物组还包含以下引物序列中的一种或多：

上游引物COL12-F2 5’-ACT TTT GCG TGG GTA TGT-3’；

下游引物COL12-R2 5'-CTC CAA AAC AAG TAG TAG C-3’。

更进一步地，所述PCR反应体系还包括10×PCR扩增缓冲液、dNTP、HostStart rTaq聚合酶、模板DNA。

更进一步地，所述试剂盒每一人份包括PCR反应体系20μL，其中，PCR反应体系包括10×PCR扩增缓冲液2.0μL、dNTP1.6μL、上游引物0.2μL、下游引物0.2μL、HostStart rTaq聚合酶0.1μL、模板DNA1.3μL，剩余由无菌双蒸水扩充至20μL；

PCR扩增反应的条件为：94℃预变形3min，94℃变性30s，58.9℃退火30s，72℃延伸2min，共30个循环，随后72℃延10min，最后4℃保存。