[发明专利]一种鸡骨常山种苗的组培快繁和离体保存方法

说明书

本发明提供了一种鸡骨常山种苗的组培快繁和离体保存方法，涉及种质保存技术领域。本发明以鸡骨常山的带芽茎段为对象，通过外植体消毒，初代培养获得不定芽，并对其进行增殖诱导、生根和离体保存等，建立了鸡骨常山的组培快繁和离体保存体系，月增殖系数达1：4，离体保存继代周期达1年左右。利用本发明所述组培快繁和离体保存方法，延长离体保存的时间，可以降低组培苗转接工作量，也避免了连续多次继代引起遗传性改变的可能，为种质保存和可持续利用提供了保证。

技术领域

本发明属于种质保存技术领域，具体涉及一种鸡骨常山种苗的组培快繁和离体保存方法。

背景技术

鸡骨常山(Alstonia yunnanensis)为夹竹桃科鸡骨常山属植物，是我国的特有物种，分布在我国西南地区海拔1100～2400米的山坡或沟谷地带。其根和叶均作药用，根中所含的单萜吲哚生物碱具有降低血压作用，是开发天然降血压药物的重要野生植物种质资源；鸡骨常山花期较长，花紫红色有香气，高脚碟状的花朵多朵簇生于枝顶，极具观赏价值；植株株型为高在2米左右的直立灌木，并具多分枝，且分枝耐修剪，很适合丛植篱植美化环境，具有重要的园林绿化应用价值。目前，鸡骨常山多采用种子播种、分株或扦插繁殖，繁殖效率低，无法满足规模化种苗生产的要求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鸡骨常山种苗的组培快繁和离体保存方法，有效地解决鸡骨常山的组培快繁问题，大大延长离体保存周期，有利于鸡骨常山种质资源的保存和开发利用，为今后的资源挖掘奠定基础。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种鸡骨常山种苗的组培快繁和离体保存方法，包括以下步骤：(1)将消毒后的幼嫩侧芽茎段为外植体，将所述外植体转移至初代培养基上进行初代培养，得无菌新芽；所述初代培养及以MS培养基为基本培养基，还包括6-BA 0.5mg/L、NAA 0.2mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L，pH值为5.8；

(2)将所述无菌新芽转到增殖培养基上继续培养，得丛生芽；所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括6-BA 0.3～1.0mg/L、IAA 0.2mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L，pH值为5.8；

(3)将所述丛生芽切割成单芽后接种于生根培养基上进行生根培养，得生根组培苗；所述生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括IAA 0.1～1.0mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L，pH值为5.8；

(4)将所述生根组培苗转移至离体保存培养基上进行离体保存；所述离体保存培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括IAA 1.0mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L，pH值为5.8。

优选的，步骤(1)所述消毒包括：将幼嫩的侧芽茎段浸泡在肥皂水中，经自来水冲洗1h后，于无菌环境中剪成带单个芽的茎段，用体积百分含量为75％的酒精消毒10s，无菌水冲洗3遍，用质量百分含量为0.1％的升汞溶液进行表面消毒6～8min，无菌水清洗3～5次。

优选的，步骤(3)得到生根组培苗后，待所述生根组培苗生根2～4条、根长2～3cm时进行移栽。

优选的，所述移栽前还包括炼苗。

优选的，所述移栽的移栽基质为包括腐叶土和生红土的混合基质，所述腐叶土和生红土的体积比为1:1。

优选的，步骤(1)所述初代培养、步骤(2)所述继续培养、步骤(3)所述生根培养和步骤(4)所述离体保存的温度均为25±3℃，光照强度均为20～40μmol/(m²·s)，光照时间均为12h/d。