[发明专利]一种细胞杀伤效力的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种细胞杀伤效力的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

（1）将携带荧光标记A的靶细胞与效应细胞混合共培养，并加入荧光标记B对靶细胞和效应细胞进行标记，加入荧光标记C对所述共培养后产生的死细胞进行染色标记作为实验组；

其中，荧光标记A、荧光标记B和荧光标记C对应的激发光波长不同；

步骤（1）中将靶细胞与效应细胞共培养时，还分别单独培养靶细胞和效应细胞作为对照组；

（2）对实验组和对照组分别使用明场、荧光标记A匹配的荧光通道、荧光标记B匹配的荧光通道以及荧光标记C匹配的荧光通道对染色标记后的细胞进行显微成像，得到显微图像；

（3）通过图像识别对所得到的显微图像中的细胞进行识别，并将同一区域的识别结果进行叠加合成分析，根据分析结果得到所述效应细胞的细胞杀伤效力检测结果；

步骤（3）所述识别结果包括细胞的位置信息、尺寸信息或荧光强度中的任意一种或至少两种的组合；

所述叠加合成分析过程中，同时显示荧光标记A和荧光标记B的细胞为活的靶细胞，同时显示荧光标记A、荧光标记B和荧光标记C的细胞为死的靶细胞，仅显示荧光标记B的细胞为活的效应细胞，同时显示荧光标记B和荧光标记C的细胞为死的效应细胞；

所述分析结果包括：靶细胞和效应细胞总数、活靶细胞数、死靶细胞数、活效应细胞数、死效应细胞数、靶细胞死亡率或效应细胞死亡率中的任意一种或至少两种的组合；

其中，对所述对照组的显微图像进行图像识别，并将识别结果进行叠加合成分析，得到对照组的靶细胞死亡率和/或对照组的效应细胞死亡率；

其中，所述靶细胞死亡率采用如下公式进行计算：

靶细胞死亡率=死靶细胞数/(活靶细胞数+死靶细胞数)×100%；

所述效应细胞死亡率采用如下公式进行计算：

效应细胞死亡率=死效应细胞数/(活效应细胞数+死效应细胞数)×100%；

步骤（3）所述分析结果还包括：细胞特异杀伤率和/或效应细胞自伤率；

其中，所述细胞特异杀伤率采用如下公式进行计算：

细胞特异杀伤率=靶细胞死亡率-对照组靶细胞死亡率；

所述效应细胞自伤率采用如下公式进行计算：

效应细胞自伤率=效应细胞死亡率-对照组效应细胞死亡率。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述荧光标记A包括荧光蛋白或细胞染料；

所述荧光蛋白包括绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白或荧光素酶中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中使用荧光标记A对靶细胞进行染色标记后，还包括洗涤的操作。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述靶细胞包括病毒感染的细胞或肿瘤细胞；

步骤（1）中所述靶细胞包括免疫细胞靶向的肿瘤细胞和/或病毒感染的细胞；

步骤（1）中所述靶细胞包括无荧光蛋白标记的和/或有荧光蛋白标记的K562细胞、Daudi细胞、Jurkat细胞、MCF-7细胞、A549细胞或HepG2细胞中的任意一种或至少两种的组合；

步骤（1）中所述效应细胞包括免疫细胞或工程化细胞；

步骤（1）中所述效应细胞包括PBMC细胞、NK细胞、T细胞、CTL细胞、LAK细胞、CIK细胞、TIL细胞、DC细胞、CAR-T细胞、CAR-NK细胞或NK92MI-CD16a细胞中的任意一种或至少两种的组合。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中所述荧光标记B为活细胞染料；

步骤（1）中所述荧光标记C为死细胞染料。

6.如权利要求1~5任一项所述的检测方法在检测细胞杀伤力、制备免疫细胞制剂中的应用。