[发明专利]一种基于细胞直径评价细胞杀伤效力的方法及其应用

权利要求书

1.一种基于细胞直径评价细胞杀伤效力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将靶细胞和效应细胞混合共培养，而后得到细胞悬液，加入细胞染料对所述细胞悬液中的死细胞进行染色；

(2)对染色后的细胞进行显微成像，得到显微图像；

(3)通过图像识别对所述显微图像中的细胞进行识别，采集细胞的尺寸信息和颜色信息，并对所得信息进行分析，根据分析结果对效应细胞的细胞杀伤效力进行评价；

在所述分析的过程中，直径大于等于靶细胞最小直径且未被染色的细胞为活的靶细胞，直径大于等于靶细胞最小直径且被染色的细胞为死的靶细胞，直径小于效应细胞最大直径且未被染色的细胞为活的效应细胞，直径小于效应细胞最大直径且被染色的细胞为死的效应细胞；

其中，所述靶细胞最小直径大于等于效应细胞最大直径。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述分析结果包括：靶细胞和效应细胞总数、活靶细胞数、死靶细胞数、活效应细胞数、死效应细胞数、靶细胞死亡率或效应细胞死亡率中的任意一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述靶细胞死亡率采用如下公式进行计算：

靶细胞死亡率＝死靶细胞数/(活靶细胞数+死靶细胞数)×100％；

所述效应细胞死亡率采用如下公式进行计算：

效应细胞死亡率＝死效应细胞数/(活效应细胞数+死效应细胞数)×100％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中将靶细胞与效应细胞共培养时，还分别单独培养靶细胞和效应细胞作为对照组。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：

对所述对照组进行显微成像，并采集对照组中细胞的尺寸信息和染色信息，得到对照组的靶细胞死亡率和/或对照组的效应细胞死亡率。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述分析结果还包括：细胞特异杀伤率和/或效应细胞自伤率；

其中，所述细胞特异杀伤率采用如下公式进行计算：

细胞特异杀伤率＝靶细胞死亡率-对照组靶细胞死亡率；

所述效应细胞自伤率采用如下公式进行计算：

效应细胞自伤率＝效应细死亡率-对照组效应细胞死亡率。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述靶细胞包括病毒感染的细胞和/或肿瘤细胞；

步骤(1)中所述靶细胞包括无荧光蛋白标记和/或有荧光蛋白标记的MCF-7细胞、A549细胞或HepG2细胞中的任意一种或至少两种的组合。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述效应细胞包括免疫细胞或工程化细胞；

步骤(1)中所述效应细胞包括PBMC细胞、NK细胞、T细胞、CTL细胞、LAK细胞、CIK细胞、TIL细胞、CAR-T细胞、CAR-NK细胞或NK92MI-CD16a细胞中的任意一种或至少两种的组合。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述细胞染料包括台盼蓝染料。

10.如权利要求1～9任一项所述的方法在检测细胞杀伤力、制备免疫细胞制剂或研究免疫细胞疗法中的应用。