[发明专利]一种游离吸附浓缩重组表皮生长因子的方法

权利要求书

1.一种游离吸附浓缩发酵液中重组表皮生长因子的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、对重组表皮生长因子的发酵液进行预处理，然后加入反相高效液相色谱填料，进行搅拌游离吸附，使重组表皮生长因子吸附在反相高效色谱填料上，形成吸附填料，待吸附填料沉降后去掉上层液，收集吸附填料；

S2、用洗脱液对吸附填料进行洗脱，并收集流岀液，即为重组表皮生长因子浓缩液；

步骤S1所述预处理的步骤为，

1）酸沉：用酸液调节重组表皮生长因子发酵液的PH至2.5，静置后进行固液分离，弃去固体沉淀，保留上清发酵液，

2）加入反相高效液相色谱填料前在上清发酵液中加入终浓度为0.7mol/L的氯化钠；

步骤S1所述反相高效液相色谱填料为硅胶基质，其表面键合有反相C4基团，其颗粒度为20μm；

步骤S1所述重组表皮生长因子发酵液采用大肠杆菌分泌表达，并添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导分泌表皮生长因子至胞外发酵液中；

步骤S2所述洗脱液包括以下组分：20v%乙醇、0.1v%三氟乙酸（TFA）。

2.根据权利要求1所述游离吸附浓缩发酵液中重组表皮生长因子的方法，其特征在于，步骤S1所述搅拌游离吸附为磁力搅拌至反相高效液相色谱填料悬起后继续搅拌15min，然后于5℃环境中静置待吸附填料沉淀。

3.根据权利要求1所述游离吸附浓缩发酵液中重组表皮生长因子的方法，其特征在于，步骤S2所述洗脱在洗脱装置中进行，所述洗脱装置包括布氏漏斗、抽滤瓶和循环真空泵。