[发明专利]制备免疫细胞的方法、免疫细胞和治疗肿瘤的药物

说明书

本发明公开了一种制备免疫细胞的方法、免疫细胞和治疗肿瘤的药物，涉及免疫细胞治疗技术领域。本发明公开的制备方法包括沉默或抑制所述免疫细胞的TIPE2基因表达的步骤或使所述免疫细胞的TIPE2基因表达的TIPE2蛋白失活的步骤。该方法可以增强免疫细胞的抗肿瘤效应，提高其对肿瘤细胞的杀伤能力，为当前提高嵌合抗原受体修饰免疫细胞的抗肿瘤能力提供了一种新的策略和思路。

技术领域

本发明涉及免疫细胞治疗技术领域，具体而言，涉及一种制备免疫细胞的方法、免疫细胞和治疗肿瘤的药物。

背景技术

目前，癌症已成为全球第二大死亡原因。然而，现有的手术切除和放化疗等手段对早期肿瘤的治疗效果较好，但会引起患者严重的不良反应。近年来，随着肿瘤免疫治疗的发展，嵌合抗原受体T细胞治疗(CAR T)治疗在抗癌方面取得了巨大的成功，特别是对血液恶性肿瘤，然而其在实体瘤治疗中尚未获得类似的令人满意的抗肿瘤作用。CAR T面临的主要挑战是缺乏特异性的肿瘤相关抗原(TAA)。

已有研究表明，NKG2D具有靶向实体瘤的潜力，其配体不仅在广泛的癌细胞表面如胰腺癌、肝细胞癌、胶质细胞瘤和淋巴瘤上均有表达，在某些肿瘤内皮和免疫抑制细胞如调节性T细胞(Treg)和骨髓来源的抑制细胞(MDSC)也有表达。迄今为止，NKG2D-CAR T细胞已应用于临床血液肿瘤治疗，并进行安全性和可行性评估，发现NKG2D-CAR T细胞在体外具有优异的抗肿瘤效果，但在体内的增殖和持久性受到限制，仍需要进一步的修饰以增强临床效果。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备免疫细胞的方法、免疫细胞和治疗肿瘤的药物。本发明提供的制备方法采用沉默或抑制TIPE2基因表达等手段，可以增强免疫细胞的抗肿瘤效应，提高其对肿瘤细胞的杀伤能力，为当前提高嵌合抗原受体修饰免疫细胞的抗肿瘤能力提供了一种新的策略和思路。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供一种制备嵌合抗原受体修饰的免疫细胞的方法，所述方法包括如下步骤中的任意一种：

步骤(a)：沉默或抑制所述免疫细胞的TIPE2基因表达；

步骤(b)：使所述免疫细胞的TIPE2基因表达的TIPE2蛋白失活。

TIPE2基因编码肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2蛋白(TIPE2蛋白)。本发明实施例的研究首次发现，在具有嵌合抗原受体修饰的免疫细胞中敲低TIPE2基因的表达例如沉默或抑制等，可增强该免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。

基于此，可以认为TIPE2对嵌合抗原受体修饰的免疫细胞的抗肿瘤效应具有重要影响，采用沉默或抑制TIPE2基因表达，或使TIPE2蛋白失活等方式都可以增强该免疫细胞的抗肿瘤效应。本发明为提高免疫细胞的抗肿瘤能力提供了一种新的策略和思路。

TIPE2蛋白失活是指：TIPE2基因正常表达的TIPE2蛋白不具有正常的生物学功能。TIPE2蛋白失活可以是正常TIPE2蛋白的氨基酸序列发生缺失、添加或替换等原因导致。

基于本发明公开的内容，对于本领域技术人员而言，容易想到采用本领域常规的基因编辑技术等实现TIPE2基因的沉默或抑制，例如RNA干扰技术。

在可选的实施方式中，在步骤(a)中，通过往所述免疫细胞内导入抑制分子的方式以使TIPE2基因的表达被沉默或抑制；所述抑制分子选自shRNA、反义RNA和siRNA中的至少一种。

在可选的实施方式中，所述抑制分子为shRNA，所述抑制分子的靶序列选自SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.9。

在可选的实施方式中，所述抑制分子的靶序列为SEQ ID NO.1。