[发明专利]一种福建莲座蕨离体保存培养基及离体保存方法

权利要求书

1.一种福建莲座蕨离体保存方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)收集福建莲座蕨羽片中的棕色孢子囊，灭菌后与水混合，制备孢子悬浮液；所述灭菌包括：在无菌环境中，将收集的棕色孢子囊用体积百分含量为75％的乙醇溶液浸泡20s，再置于质量百分含量为0.2％的氯化汞水溶液中灭菌4min，无菌水漂洗4～5次；

(2)将所述孢子悬浮液接种至孢子无菌萌发培养基上进行萌发培养，得幼原叶体；所述孢子无菌萌发培养基以1/10MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8；所述萌发培养的温度为25±2℃，光照强度为1000lx，光照时间为12h/d；

(3)将所述幼原叶体接种于增殖培养基上进行增殖培养，得原叶体团；所述增殖培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括：蔗糖20g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8；所述增殖培养的温度为25±2℃，光照强度为1000lx，光照时间为12h/d；

(4)将所述原叶体团转接至福建莲座蕨离体保存培养基上进行离体保存；所述离体保存培养基由以下成分组成：花宝2号3g/L、NAA 0.5mg/L、蔗糖20g/L、活性炭1g/L和琼脂6g/L，pH值为5.8；所述离体保存的温度为25±2℃，光照强度为1000lx，光照时间为12h/d。

2.根据权利要求1所述离体保存方法，其特征在于，步骤(1)所述收集包括：采集无病虫害且着生有棕色孢子囊但未开裂的福建莲座蕨小羽片，在解剖镜下取下完整孢子囊装入经灭菌的DNA纯化柱中，所取孢子囊数量为40个/DNA纯化柱。

3.根据权利要求1所述离体保存方法，其特征在于，将经所述灭菌的棕色孢子囊与无菌水混合，刺破孢子囊，形成孢子悬浮液。

4.根据权利要求1所述离体保存方法，其特征在于，所述增殖培养时，每30天继代一次。