[发明专利]一种用马来氏网结合高通量测序调查昆虫多样性的方法

权利要求书

1.一种用马来氏网结合高通量测序调查昆虫多样性的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)针对实施地点面积布点，每个样点安放一个马来氏网；在马来氏网的收集瓶内装3/4的无水乙醇，14天收集一次昆虫；

(2)收集来的昆虫编写测序编号送去高通量测序；

(3)高通量测序数据处理：识别并剔除疑问序列，利用FLASH软件进行质量检验；使用UPARSE软件对序列配对连接及去除嵌合体，并按97％的序列相似度归并和划分OTU，将丰度值低于全体样本测序总量0.001％的OTU去除，以得到处理后的OTU序列；

(4)使用QIIME软件，对OTU丰度矩阵中每个样本的序列总数在不同深度下随机抽样，以每个深度下抽取到的序列数及其对应的OTU数绘制稀疏曲线图和各样本的丰度等级曲线图，以确定测序深度是否合理；

(5)在测序深度合理，可保证后续分析结果准确可靠的前提下，对各OTU所对应的序列进行NCBI Blast比对，从而对各OTU进行鉴定，即昆虫鉴定；后使用QIIME软件，分析各样本在门、纲、目、科、属五个分类水平上的组成和丰度分布情况，使用R软件绘制成图，以展示各分类水平上的昆虫组成；

(6)通过Alpha多样性分析、Beta多样性分析，得到不同马来氏网安放点昆虫种群间的结构差异和多样性，从而可进一步查阅文献分析害虫及其天敌的动态；

步骤(2)高通量测序PCR过程中，扩增基因选用线粒体DNAbarcoding片段；上游引物为mlCOIintF，上游引物序列：

GGWACWGGWTGAACWGTWTAYCCYCC；下游引物为HCO2198，下游引物序列：TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA；该基因片段能够实现对各昆虫物种的准确鉴定。