[发明专利]油酸水合酶突变体及其在制备10-羟基硬脂酸中的应用

权利要求书

1.一种油酸水合酶突变体，其特征在于，其是由下述任一氨基酸序列组成的蛋白质：

(1) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸；

(2) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第122位苯丙氨酸替换为亮氨酸；

(3) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第622位谷氨酸替换为甘氨酸；

(4) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第122位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第15位苏氨酸替换为丙氨酸；

(5) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第122位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第15位苏氨酸替换为丝氨酸；

(6) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第122位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第15位苏氨酸替换为天冬酰胺；

(7) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第122位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第15位苏氨酸替换为甘氨酸；

(8) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第122位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第15位苏氨酸替换为半胱氨酸；

(9) 将如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第122位苯丙氨酸替换为亮氨酸，第15位苏氨酸替换为异亮氨酸。

2.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求1所述油酸水合酶突变体。

3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如权利要求2所述核酸。

4.一种重组表达转化体，其特征在于，所述重组表达转化体包含如权利要求3所述重组表达载体。

5.一种重组油酸水合酶突变体催化剂，其特征在于，是以下形式中的任意一种：

(1) 培养如权利要求4所述重组表达转化体，分离含有如权利要求1所述油酸水合酶突变体的转化体细胞；

(2) 培养如权利要求4所述重组表达转化体，分离含有如权利要求1所述油酸水合酶突变体的粗酶液；

(3) 培养如权利要求4所述重组表达转化体，分离含有如权利要求1所述油酸水合酶突变体的粗酶液，将所述油酸水合酶突变体的粗酶液干燥得到的粗酶粉。

6.一种如权利要求1所述油酸水合酶突变体或如权利要求5所述重组油酸水合酶突变体催化剂在制备10-羟基硬脂酸中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

使用如权利要求1所述油酸水合酶突变体或如权利要求5所述重组油酸水合酶突变体催化剂，催化底物油酸的水合反应制备10-羟基硬脂酸。

7.一种如权利要求1所述油酸水合酶突变体或如权利要求5所述重组油酸水合酶突变体催化剂在制备10-羰基硬脂酸中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 使用如权利要求1所述油酸水合酶突变体或如权利要求5所述重组油酸水合酶突变体催化剂，催化底物油酸的水合反应制备10-羟基硬脂酸；

(2) 使用如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的10-羟基硬脂酸脱氢酶催化步骤(1)的反应产物10-羟基硬脂酸氧化生成10-羰基硬脂酸。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：10-羟基硬脂酸脱氢酶催化10-羟基硬脂酸氧化生成10-羰基硬脂酸的反应需要辅酶NAD⁺的参与，反应过程中NAD⁺转化生成NADH，将该反应与NADH氧化酶催化的氧气还原反应耦联，使辅酶NADH氧化再生NAD⁺。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：辅酶NAD⁺的浓度为0.1-0.5 mM。